心肌细胞凋亡在心脏的生理、病理发展过程中起重要作用，在鸡的很多疾病病程中都伴随有心肌凋亡和损伤。为了研究鸡心肌细胞凋亡中新基因的筛选及其对凋亡的影响，进行了以下三个试验:　　1.鸡胚心肌细胞的分离与培养　　为建立稳定的鸡胚原代心肌细胞分离和培养模型，并获得高纯度的鸡胚原代心肌细胞，我们选用14日龄的白来航鸡胚，无菌操作取其心室组织，用预冷的HBSS漂洗后，我们将心室组织，0.05％胰酶消化心肌组织，轻轻吹打，4℃1000r/min离心获得心肌细胞，将其制成细胞悬液，接种于细胞培养瓶，30min差速贴壁后将上清转接于6孔或24孔培养板，然后将培养板置于5％ CO2培养箱中37℃培养。显微镜观察细胞形态，并通过免疫细胞化学染色法进行肌动蛋白鉴定。结果显示，通过此种方法我们成功地分离和培养了高纯度鸡胚原代心肌细胞。　　2.过氧化氢对心肌细胞等的凋亡诱导研究　　由于过氧化氢具有广泛的细胞毒性作用，对几乎所有类型细胞（包括细胞系、原代细胞、肿瘤细胞和终末分化细胞）都有作用，因此，过氧化氢是目前应用最为广泛的细胞凋亡诱导剂。然而，在很多研究报道中，等效的细胞毒性所用过氧化氢使用剂量范围变化很大，虽然这种差异导致的原因并不是很明确。过氧化氢通过某种特定机制，如坏死、凋亡或坏死等，从而诱导细胞死亡剂量范围的确定是非常关键的，但目前没有研究系统的比较那些细胞死亡通路中过氧化氢的敏感性。在本研究中，三种细胞（293T细胞、原代成纤维细胞、终末分化的心肌细胞）使用剂量范围较广的过氧化氢进行处理。我们测定了凋亡起始时间和结束时间，并通过RT-PCR检测了caspase-9、P53、NF-κB和RIP表达的变化。结果显示，293T细胞对过氧化氢最敏感，从0.1-1.6 mM所有浓度可导致其发生凋亡或坏死。过氧化氢浓度高于0.4mM时，可导致原代细胞发生坏死。然而，过氧化氢浓度低于0.4mM时，原代细胞表现出典型的细胞凋亡迹象;过氧化氢浓度低于0.2mM时，原代细胞可存活36h。结果表明，过氧化氢是一种广泛的有效的细胞凋亡诱导剂，但不同的细胞类型使用的剂量范围不同;与原代细胞相比，细胞系若要避免因坏死性凋亡或坏死而导致细胞死亡，须使用低剂量的过氧化氢，且处理时间要减少。　　3.鸡心肌细胞凋亡中关键新基因的筛选及其作用机制研究　　过表达和查找与其互作的蛋白仍是当前研究新基因功能的主要方法，通过之前的测序，我们发现了大量新的转录本，为了筛选出这些基因中与凋亡密切关联的基因，注释和筛选这些的发现的新转录本，对有阅读框的基因，构建pcDNA3.1(+)载体，转染鸡心肌原代细胞，结果发现，Novel418号基因能显著提高Caspase-3和9的表达，有促进凋亡的潜在作用，酵母双杂交筛选结果显示，其能和STK11、FRMD4B、GJA5、UCHL5、JAM2等基因发生互作，但其不直接与凋亡相关的蛋白或死亡结构域结合，其功能的发挥可能是通过结合泛素降解凋亡阻抑相关基因来实现。