论文部分内容阅读
目的通过对真性性早熟、假性性早熟、同年龄段未发育女童血清中食欲素-A（Orexin-A）、瘦素（Leptin）、吻肽（Kisspeptin）及性激素水平的检测,分析Orexin-A、Leptin与性早熟的关系,并结合动物实验观察Orexin-A对大鼠性发育及血清黄体生成素（luteinizing hormone,LH）、卵泡刺激素（follicle-stimulating hormone,FSH）、雌二醇（estradiol,E2）、Kisspeptin和Leptin水平的影响,进一步探讨能量代谢在下丘脑-垂体-性腺轴（HPGA）启动中的作用。方法1临床研究选取2018年01月至2019年12月苏北人民医院儿童性早熟专病门诊确诊为CPP的4-8岁女童48例为CPP组。选取同期苏北人民医院儿童性早熟专病门诊确诊为PPP的4-8岁女童40例为PPP组。并选取同期同年龄段健康体检女孩33名为对照组进行研究。通过t检验、方差分析、Kruskal-Wallis H检验比较各组的体质量指数（body mass index,BMI）、骨龄、子宫及卵巢容积、LH、FSH、E2、LH峰值、FSH峰值、LH峰值/FSH峰值、Orexin-A、Leptin、Kisspeptin水平是否存在差异。并采用Spearman相关分析法分析血清Orexin-A、Leptin、BMI和Kisspeptin及性发育有关指标是否存在关联。2动物实验2.1将100只5日龄的雌性SPF级SD大鼠随机分成4组（每组25只）,正常对照组,性早熟组,性早熟+Orexin-A组,性早熟+Orexin-A+OX1R拮抗剂组。性早熟组、性早熟+Orexin-A组、性早熟+Orexin-A+OX1R拮抗剂组皮下注射25μl的含达那唑（300μg/只）的乙醇与乙二醇的混合液（体积比1:1）一次,建立性早熟大鼠模型。正常对照组注射同体积的不含达那唑的乙醇与乙二醇的混合液一次作为对照组。15日龄后,性早熟+Orexin-A组每天侧脑室注射1次0.5nmol/L的Orexin-A 5μl,直至解剖;性早熟+Orexin-A+OX1R拮抗剂组每天侧脑室注射1次同样浓度的Orexin-A 5μl+30nmol/L的OX1R拮抗剂5μl,直至解剖。实验中,性早熟+Orexin-A组大鼠死亡4只;性早熟+Orexin-A+OX1R拮抗剂组大鼠死亡5只。2.2记录每只大鼠首次阴道开口时间,并分别在青春前期、青春期及青春后期3个时间段留取外周血标本。测定血清性激素、Kisspeptin、Leptin水平。通过t检验、Kruskal-Wallis H检验比较各组大鼠阴道开启时间及各时间段的血清性激素、Kisspeptin、Leptin水平是否存在差异。结果1临床研究结果1.1 CPP组的BMI指数[16.7（15.4,18.0）kg/m~2],PPP组BMI指数[16.2（15.5,17.2）kg/m~2],对照组BMI指数[15.7（15.1,17.3）kg/m~2],组间差异无统计学意义（H=2.91,P=0.233）。1.2 CPP组血清Orexin-A值[0.6（0.27,0.91）ng/mL]低于PPP组[1.05（0.65,2.54）ng/mL]及正常对照组[0.84（0.6,1.95）ng/mL]（H=16.947,P=0.000）。CPP组血清Leptin值[3.98（2.17,10.47）ng/mL]高于PPP组[2.28（1.54,5.33）ng/mL]及正常对照组[1.92（1.37,4.55）ng/mL]（H=9.36,P=0.009）;血清Kisspeptin值在三组间无明显差异（H=2.188,P=0.335）。1.3 Orexin-A与年龄、LHmax、LHmax/FSHmax呈负相关（r=-0.251,-0.376,-0.304）（P＜0.05）。Leptin与BMI、骨龄、LH、LHmax、LHmax/FSHmax、Kisspeptin呈正相关（r=0.567,0.315,0.278,0.314,0.293,0.4）（P＜0.05）。Orexin-A与Leptin及Kisspeptin不相关。2动物实验结果2.1与对照组相比,性早熟组大鼠首次阴道开口时间（日龄）明显提前（H=3.092,P=0.012）;性早熟+Orexin-A组较性早熟组延迟,性早熟+Orexin-A+OX1R拮抗剂组介于性早熟组及性早熟+Orexin-A组中间,但后3组间比较差异无统计学意义。2.2青春前期:性早熟+Orexin-A组LH水平低于性早熟组（t=-3.082,P=0.01）;性早熟+Orexin-A组Kisspeptin水平低于性早熟组（t=-3.732,P=0.003）;性早熟+Orexin-A组E2水平低于性早熟组和性早熟+Orexin-A+OX1R拮抗剂组（t=-2.476,P=0.042;t=-3.725,P=0.012）;性早熟+Orexin-A组Leptin水平低于性早熟组和性早熟+Orexin-A+OX1R拮抗剂组（t=-3.289,P=0.013;t=-10.742,P=0.001）。青春期:性早熟+Orexin-A组LH水平低于性早熟组（t=-2.469,P=0.028）;性早熟+Orexin-A组Leptin水平低于性早熟组和性早熟+Orexin-A+OX1R拮抗剂组（H=-2.771,P=0.034;H=-3.429,P=0.004）。青春后期:性早熟+Orexin-A组FSH水平低于性早熟+Orexin-A+OX1R拮抗剂组（t=-2.955,P=0.012）;在Leptin水平上,性早熟+Orexin-A组Leptin水平低于性早熟组和性早熟+Orexin-A+OX1R拮抗剂组（t=-3.674,P=0.004;t=-5.258,P=0.000）。结论1、Orexin-A可抑制HPGA的启动和进展,其作用途径可能通过抑制下丘脑的Kisspeptin的表达。2、Leptin在激活HPGA、诱发青春期的发动中起促进作用。3、能量代谢与HPGA的启动具有相关性。