【摘 要】
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目的:本实验通过静电纺丝结合乳化交联法制备PLGA/CS复式微球,分别将BMP-2和Pac-525包载于复式微球中的PLGA微球和壳聚糖外壳中,并将双重载药的复式微球分散在矿化胶原/PCL支架中,对其缓释特性以及成骨和抑菌性能进行研究,为其在临床上骨缺损再生修复的应用提供技术支持。方法:1.载BMP-2 PLGA微球的制备将BMP-2溶液与PLGA溶液超声混匀,通过静电纺丝的方法制备载BMP-2的
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目的:本实验通过静电纺丝结合乳化交联法制备PLGA/CS复式微球,分别将BMP-2和Pac-525包载于复式微球中的PLGA微球和壳聚糖外壳中,并将双重载药的复式微球分散在矿化胶原/PCL支架中,对其缓释特性以及成骨和抑菌性能进行研究,为其在临床上骨缺损再生修复的应用提供技术支持。方法:1.载BMP-2 PLGA微球的制备将BMP-2溶液与PLGA溶液超声混匀,通过静电纺丝的方法制备载BMP-2的PLGA微球。2.双重载药PLGA/CS复式微球的制备将第一步制得的载BMP-2的PLGA微球分散在载Pac-525的壳聚糖溶液中,混合均匀,通过乳化交联法制备双重载药PLGA/CS复式微球。3.携载PLGA/CS复式微球的矿化胶原/PCL支架的制备将上一步制得的双重载药复式微球与矿化胶原/PCL混合均匀,通过冷冻干燥法制得携载复式微球的多孔支架材料。4.复式微球与支架材料的理化特性通过扫描电子显微镜和激光共聚焦显微镜观察微球和支架的形态,并测量微球的粒径分布和支架的孔径分布。通过万能力学测试机测量支架的抗压强度。通过紫外分光光度计和Elisa试剂盒对微球的药物包封率和缓释动力学进行检测。5.材料的生物相容性和成骨分化性能将BMSCs接种于支架材料表面,分别在1,3,5天使用CCK-8试剂盒检测细胞在材料表面的增殖效果。并在第三天使用扫描电子显微镜(SEM)和激光共聚焦显微镜观察细胞在支架表面的形态。将大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)接种于孔板中,成骨分化培养基与材料浸提液组成的混合液诱导分化14天,检测细胞碱性磷酸酶活性(ALP)。7.支架的抑菌性能通过观察支架10天,20天,30天的浸提液用牛津杯琼脂扩散法在金黄色葡萄球菌和大肠杆菌琼脂培养板上所形成的抑菌环的大小,来评估材料的抑菌性能。结果:1.复合支架的理化特性扫描电子显微镜和激光共聚焦显微镜显示,PLGA微球表面光滑,粒径分布均匀,大多集中在6-12um,包封率约为83.75±3.25%;复式微球表面成致密皱褶状,荧光染色和微球断面可见PLGA微球被包裹在壳聚糖外壳内,壳聚糖外壳包封率约为66.21±2.29%。支架成多孔结构,复式微球分散在其中,支架孔径约为97.68um,孔隙率约为72.75%,抗压强度约为0.422±0.019Mpa.2.复合支架的药物缓释动力学缓释实验显示,单纯复式微球的壳聚糖外壳在初期有一定的突释现象产生,而后释放速度趋于平缓。PLGA微球由于有壳聚糖外壳的存在,在很长一段时间以极低的速度释放,但随着壳聚糖外壳的裂解,又出现了较快速度的释放。同时,对比单纯微球组和载微球支架组的缓释动力学可知,支架的存在,在一定程度上减缓了微球释药的速率。3.复合支架的生物相容性及成骨活性扫描电子显微镜和激光共聚焦显微镜观察细胞在支架材料表面形态显示,细胞铺展良好,成梭形。CCK8结果显示细胞在支架表面增殖效果良好。成骨分化实验结果显示,载药组的碱性磷酸酶活性明显高于阴性对照组。4.复合支架的抑菌性能抑菌实验结果显示第10天的缓释液有较为明显的抑菌环产生,第20,30天的抑菌环直径虽然较第10天有所缩小,但较PBS组仍有抑菌环产生。结论:制备出的双重载药PLGA/CS/MC/PCL支架,体外实验结果初步证明其具有长效抗菌和成骨作用。
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