【摘 要】
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DNA甲基化是表观遗传学的一种,参与细胞遗传与发育等关键过程,而DNA甲基化转移酶在此过程中发挥重要作用,因此将其作为相关疾病的分子标记物具有显著的诊断价值。本文设计一种含4个DNA甲基化转移酶Dam识别位点的哑铃环,该哑铃环与末端脱氧核苷酸转移酶Td T扩增反应结合,引入CISPR/Cas12a系统,用于检测Dam。当存在甲基化转移酶Dam时,环上的腺嘌呤残基（N~6）被甲基化,随后被内切酶Dp
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DNA甲基化是表观遗传学的一种,参与细胞遗传与发育等关键过程,而DNA甲基化转移酶在此过程中发挥重要作用,因此将其作为相关疾病的分子标记物具有显著的诊断价值。本文设计一种含4个DNA甲基化转移酶Dam识别位点的哑铃环,该哑铃环与末端脱氧核苷酸转移酶Td T扩增反应结合,引入CISPR/Cas12a系统,用于检测Dam。当存在甲基化转移酶Dam时,环上的腺嘌呤残基（N~6）被甲基化,随后被内切酶Dpn I识别并剪切,由Td T扩增,延伸单链富含T碱基,能与Cas12a中的cr RNA互补配对,顺式切割后激发反式切割,将报告DNA非特异性切割产生荧光信号。本方法的检测限低至1.26×10-3U/m L（S/N=3）,能在3h内完成检测。此外,本方法还可以很好地筛选甲基化转移酶Dam的抑制剂,并量化其在复杂生物样本（人类血清）中的活性,具有良好的特异性和稳定性。
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