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目的:检测合并肝细胞脂肪变性的慢性乙型肝炎(CHB)患者外周血及肝内的CD4+ CD25+调节性T细胞(Tregs)水平,研究CD4+ CD25+ Tregs与丙氨酸氨基转移酶(ALT)、HBV DNA、肝组织炎症活动度(G)的关系,并与CHB患者及正常对照组进行比较,旨在探讨肝细胞脂肪变性对CHB患者Tregs的影响及意义,为研究CHB的免疫发病机制和CHB患者临床治疗提供新的思路。方法:收集2008年4月-12月在我院治疗的合并肝细胞脂肪变性的CHB患者10例,CHB患者20例。所有患者均进行了肝组织病理分析,并且6个月内未应用抗病毒及免疫调节治疗。CHB患者均符合2000年(西安)全国传染病与寄生虫病学会制定的病毒性肝炎诊断标准,肝细胞脂肪变性经肝组织病理证实。并选择同期在我院体检的正常对照19例。应用全自动生化分析仪检测血清ALT水平;酶联免疫法检测HBV血清学标志;定量PCR分析检测HBV DNA载量。并检测抗-HAV、抗-HCV、抗-HDV、抗-HEV、抗-HIV,以除外其它嗜肝病毒及HIV感染。取外周肝素抗凝血,应用CD4、CD25免疫荧光抗体染色,红细胞裂解液溶解红细胞,完全溶血后加0.02M磷酸盐缓冲液洗涤,应用加多聚甲醛-磷酸盐缓冲液固定,重新悬浮细胞,上流式细胞仪检测,淋巴细胞设门,分析CD4+ T细胞中CD4+ CD25+ T细胞的百分比。HE染色观察肝组织炎症活动度和肝细胞病理变化,Masson三重染色观察肝组织纤维化程度。采用Power VisionTM二步法对肝组织进行Foxp3免疫组织化学染色,棕黄色着色为阳性表达,每例肝组织选取阳性表达较多的5个高倍视野(×400)计数阳性细胞,取平均值。应用SPSS 11.5统计软件对实验数据进行分析,组间比较采用Kruskal-Wallis H检验或Mann-Whitney U检验,两组间构成比的比较采用χ2检验,相关性分析采用Spearman秩相关检验。结果:1各组人群一般资料及ALT、HBV DNA水平:合并肝细胞脂肪变性的CHB患者及单纯CHB患者ALT水平明显升高,两组间ALT、HBV DNA水平比较,差异均无统计学意义(P值均>0.05),正常对照组ALT水平均在正常范围(<40U/L),HBV DNA均阴性(<1×103 copies/ml)。2外周血CD4+ CD25+ T细胞水平:合并肝细胞脂肪变性的CHB患者CD4+ CD25+ T细胞百分比低于单纯CHB患者(U=36.0, P<0.01),但高于正常对照组(U=36.0, P<0.01);根据ALT水平高低(ALT≥80U/L和ALT<80U/L)分为高ALT水平组与低ALT水平组,发现高ALT水平组CD4+ CD25+ Tregs百分比高于低ALT水平组(U=61.0, P<0.05)。3普通病理及Foxp3免疫组织化学染色:30例患者均进行了肝组织活检,其中肝组织炎症分级为G1者0例,G2者14例,G3者16例,G4者0例;纤维化分期为S1者9例,S2者11例,S3者10例,S4者0例。CHB患者肝组织主要表现为小叶内肝细胞变性、坏死及炎性细胞浸润,汇管区有炎性细胞浸润,并向小叶内延伸,甚至出现桥接坏死,汇管区周围纤维化扩大,部分有纤维间隔形成;合并肝脂肪变性的CHB患者肝组织还有不同程度的脂肪变,以中央静脉周围最为明显,多呈大泡性,肝细胞体积较正常明显增加,极度肿胀,细胞质内充满脂肪空泡,细胞核偏位,脂变肝细胞界限不清,肝窦变窄。两组患者肝组织炎症分级、纤维化分期比较,差异均无统计学意义(P值均>0.05)。Foxp3在T淋巴细胞核内特异性表达,阳性细胞主要集中在炎症明显的汇管区,小叶内部分炎症坏死灶中也可见Foxp3阳性细胞浸润,正常肝组织中未见Foxp3阳性细胞。CHB合并肝细胞脂肪变性组阳性细胞数量明显低于CHB组(U=19.0, P<0.01),但高于正常对照组(U=0, P<0.01);肝组织炎症分级为G3组阳性细胞数明显高于G2组(U=32.0, P<0.01)。4相关性分析:CHB合并肝细胞脂肪变性组及CHB组HBV DNA水平与外周血CD4+ CD25+ T细胞的百分比无相关性,等级相关系数rs=0.081,P>0.05。结论:1 CHB患者外周血CD4+ CD25+ T细胞明显高于正常对照组,并且高ALT水平组CD4+ CD25+ T细胞百分比高于低ALT水平组,G3组肝内Foxp3阳性细胞数明显高于G2组,表明Tregs与CHB患者肝脏炎症活动密切相关,在CHB进展中发挥重要作用。2在ALT水平、HBV DNA载量、肝组织炎症分级及纤维化分期无明显差别的情况下,合并肝细胞脂肪变性的CHB患者外周血CD4+ CD25+ T细胞百分比及肝内Foxp3阳性细胞数均低于CHB患者,其数量下降可能导致对炎症反应的抑制作用减弱,进而加快CHB疾病进展。3 HBV DNA水平与外周血CD4+ CD25+ T细胞百分比无相关性,提示Tregs可能对HBV DNA的清除无明显影响。