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γ-亚麻酸(γ-linolenic acid,GLA)作为人体的一种必需脂肪酸,是具有重要生理活性物质的前列腺素PG-Ⅰ和PG-Ⅱ的前体,它在人体内由Δ<6>-脂肪酸脱氢酶(Δ<6>-fatty acid desaturase)催化亚油酸转化而来.同时GLA还具有抗革兰氏阳性菌、阴性菌,抗HIV感染,抗肿瘤,抗多种炎症和抗粥性硬化等作用,具有很高的药用价值.然而传统来源的GLA由于受许多自然条件的限制,资源有限不能满足市场需求,开发新的GLA来源已备受关注.毕赤酵母(Pichia pastoris)表达系统是近年来应用较多的一种外源基因表达系统,其中含有底物亚油酸以及丰富的油酸(亚油酸的底物),是生产GLA很有潜力的表达系统.为了在毕赤酵母中建立一种新的合成γ-亚麻酸的表达体系,该研究将高山被孢霉和少根根霉Δ<6>-脂肪酸脱氢酶基因与毕赤胞内表达载体pPIC3.5K连接,SacⅠ线性化后电击法转化毕赤酵母GS115,获得的转化子经PCR鉴定目的基因已整合到毕赤酵母的基因组中.用甲醇诱导表达,通过脂肪酸气相色谱和气相色谱-质谱(GC-MS)联用分析表明Δ<6>-脂肪酸脱氢酶基因在毕赤酵母中获得表达,γ-亚麻酸含量分别占总脂肪酸的17.02﹪和6.2﹪.与此同时,转基因酵母细胞中还检测到了C16:2Δ<6,9>、C16:2Δ<6,9>、C16:2Δ<6,9>、C18:4<8,11,14,17>OTA的合成,这说明了Δ<6>脂肪酸脱氢酶在毕赤酵母中的催化功能没有链长特异性,而只有键位特异性.但从脂肪酸的合成量来说,Δ<6>脂肪酸脱氢酶偏好于亚油酸.对少根根霉Δ<6>脂肪酸脱氢酶基因转译起始密码子进行改造,提高了基因在毕赤酵母中的表达量.γ-亚麻酸含量从原来的6.2﹪提高到10.4﹪.以高山被孢霉Δ<6>脂肪酸脱氢酶基因为代表进行转基因毕赤酵母最佳表达条件的探索.将不同宿主的转基因毕赤酵母分别在不同甲醇浓度、不同诱导温度、不同诱导时间、不同通气量、甲醇-甘油混合诱导等条件下培养.结果表明在以毕赤酵母GS115为表达宿主,终浓度0.5﹪的甲醇为诱导物,诱导温度20℃,诱导时间72小时,高通气量的条件下,Δ<6>脂肪酸脱氢酶的活性最高,γ-亚麻酸在总脂肪酸中含量达到17.07﹪.该研究是国内外首次将Δ<6>脂肪酸脱氢酶基因转化入毕赤酵母表达系统进行研究的报道.