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目的;探讨玫瑰挥发油及其3种单体化合物(香叶醇、β-香茅醇和丁香酚)的体外抗念珠菌活性及玫瑰挥发油与氟康唑在联合抑菌实验中的相互作用,为玫瑰挥发油抗菌机理、有效成分和临床应用研究打下基础;同时对NCCLS-M27-A方案中的常量和微量液基稀释法结果进行比较。
方法;1.采用芽管试验及厚壁孢子试验对分离自临床患者的61株念珠菌作鉴别,区别白念珠菌和非白念珠菌,然后用API20CAUX试验条对非白念珠菌进一步作菌种鉴定。
2.采用纸片扩散法药敏试验对玫瑰挥发油及其3种单体化合物抗念珠菌活性进行定性实验,同时设置空白对照和阳性对照。
3.参照美国国家临床试验室标准化委员会(NCCLS)制定的M27-A方案中的常量和微量液基稀释法,检测玫瑰挥发油对61株临床分离念珠菌以及质控、参考菌株的最小抑菌浓度(MIC)与最小杀菌浓度(MFC),并以氟康唑和两性霉素B作为质控药物。
4.采用棋盘微量稀释法对15株念珠菌进行玫瑰挥发油与氟康唑的体外联合抑菌试验。
5.应用微量稀释法检测玫瑰挥发油中的3种单体化合物对61株临床分离念珠菌、质控菌株及参考菌株的最小抑菌浓度(MIC)与最小杀菌浓度(MFC),同时以氟康唑和两性霉素B作为质控药物。
结果;1.分离自临床患者的61株念珠菌,经鉴定证实为白念珠菌42株(68.85%)、光滑念珠菌5株(8.20%)、热带念珠菌3株(4.92%)、近平滑念株菌8株(13.11%)、克柔念珠菌2株(3.28%)及季也蒙念珠菌1株(1.64%)。
2.纸片扩散法药敏试验中玫瑰挥发油(30%、20%、10%和5%)的抑菌圈直径为28mm、24mm、18mm和14mm;其3种单体化合物(15%香叶醇、15%β-香茅醇和15%丁香酚)的抑菌圈直径分别为22mm、27mm和18mm;空白对照1%DMSO为0mm;阳性对照0.2%FCZ的抑菌圈直径为20mm。
3.玫瑰挥发油对临床分离念珠菌均有较强的抗菌活性,且各菌种间差异无显著性;两种方法测定玫瑰挥发油对念珠菌的MIC值一致率为93%,二者无显著性差异(P=0.18)。
4.玫瑰挥发油与氟康唑联用对氟康唑敏感株及耐药株均表现出较好的协同和相加作用,无拮抗作用;两组间分数抑菌浓度指数(FICI)差异无显著性(P=0.545)。
5.三种单体化合物对临床分离念珠菌均有较强的抗菌活性,平均MIC、MFC分别为:香叶醇424.70μg/mL与505.37μg/mL,β-香茅醇411.70μg/mL与455.78μg/mL,丁香酚579.15μg/mL与842.64μg/mL。
结论;1.玫瑰挥发油及其3种单体化合物对临床分离念珠菌均有不同程度的抗菌作用。
2.常量稀释法与微量稀释法有良好的一致性,且微量法更具有操作简便、节约药物和试剂、减少污染机会、重复性好等优点,更适于临床实验室应用。
3.玫瑰挥发油与氟康唑联用对念珠菌具有体外协同抑菌作用。
4.香叶醇、β-香茅醇和丁香酚为玫瑰挥发油抗念珠菌的有效单体成分。
5.玫瑰挥发油及其3种单体化合物抗念珠菌作用方式可能为杀菌。