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Mx蛋白是大分子GTP酶动态蛋白超家族成员,是干扰素诱导产生的关键抗病毒蛋白。Mx蛋白能抑制许多病毒的复制,包括单链RNA病毒、双链RNA病毒以及反转录病毒复制周期的早期阶段。Mx蛋白有细胞核和细胞浆两种形式,啮齿类Mx蛋白在胞核积聚,人的MxA、啮齿类的Mx2和猪的Mx1蛋白定位于胞浆。胞核内的Mx蛋白对甲型流感病毒等细胞核内复制的病毒具有抑制作用,而胞浆内的Mx蛋白能抑制水泡性口炎病毒、布亚病毒等胞浆内复制病毒的增殖。Mx蛋白具有广谱的抗病毒效应,与双链RNA依赖性蛋白酶R,2’5’-寡腺苷酸合成酶,均由IFN诱导产生,共同完成IFN的抗病毒生物学效应。本研究从经IFN-a处理的猪外周血单核淋巴细胞提取总RNA,根据已发表序列设计引物,用RT-PCR扩增得猪Mxl cDNA。将猪Mxl cDNA克隆入真核表达载体pCDNA3.1-HA,构建重组表达质粒pCDNA3.1-HA-Mxl。以实验室现有的pColdI-MxA为模板,设计特异性的引物,通过PCR扩增获得MxA cDNA,并将其克隆至真核表达载体pCDNA3.1-HA,构建重组真核表达质粒pCDNA3.1-HA-MxA。MxA蛋白详细的抗病毒机理尚未完全清楚,通过突变分析发现,MxA发挥抗病毒作用与其自身结构组成有很大的关系,已有研究证明,突变MxA的612位氨基酸(由亮氨酸L突变为赖氨酸K)可以使其失去GTPase活性,和自我装配功能,对一些病毒失去抗性,但是保留GTP结合活性,依然对流感病毒依然有较好的抵抗力,并且易于形成稳定的结构形式。本研究通过quick change方法突变MxA的612位氨基酸,使其由亮氨酸L突变为赖氨酸K,突变后的重组真核表达质粒pCDNA3.1-HA-MxA命名为pCDNA3.1-HA-MxA(L612K)。将pCDNA3.1-HA-Mx1、pCDNA3.1-HA-MxA、pCDNA3.1-HA-MxA (L612K)质粒转染MARC-145细胞,并经Western Blotting方法检测Mx蛋白在细胞中的表达。分别用pCDNA3.1-HA-Mx1、pCDNA3.1-HA-MxA、pCDNA3.1-HA-MxA (L612K)质粒转染MARC-145细胞,6小时以后用猪繁殖与呼吸综合征病毒感染细胞,通过TCID50检测Mx蛋白对PRRSV在MARC-145细胞上复制的抑制作用,间接免疫荧光检测Mx蛋白对PRRSV在MARC-145细胞上复制的影响,荧光实时定量PCR检测Mx蛋白对PRRSV mRNA水平的影响,实验证明细胞内表达的Mx1、MxA、MxA(L612K)蛋白对于PRRSV病毒均具有抗病毒活性,MxA(L612K)蛋白由于其易于降解在感染后24h内抗病毒效果较好,MxA蛋白的对PRRSV的抗病毒作用优于Mx1,为Mx蛋白生物学功能的进一步研究和应用奠定了基础,而关于Mx蛋白的抗病毒机制还有待于进一步研究。