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目的:本课题拟用系统溶剂提取法制备中药蛇六谷石油醚萃取物。用 MTT法检测其对人胃癌SGC-7901细胞的体外抑制作用,并进一步用Western Blot法检测其对细胞凋亡相关蛋白 survivin、Bcl-2、Bax、Cleaved-Caspase-9表达的影响,初步阐明蛇六谷石油醚萃取物诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡的机制,为蛇六谷抗肿瘤的临床应用提供实验依据。 方法: 1、运用系统溶剂提取法对蛇六谷化学成分进行粗提取和初步分离,得蛇六谷石油醚萃取物。 2、体外培养人胃癌SGC-7901细胞,应用MTT法检测蛇六谷石油醚萃取物对人胃癌SGC-7901细胞增殖的影响。 3、不同浓度的蛇六谷石油醚萃取物作用于人胃癌SGC-7901细胞24h后,用Western Blot法检测与细胞凋亡相关的蛋白survivin、Bcl-2、Bax、Cleaved-Caspase-9的表达。 结果: 1、1Kg蛇六谷干燥饮片经系统溶剂提取法提取后得到蛇六谷石油醚萃取物5.1g,得率为0.51%。 2、不同浓度的蛇六谷石油醚萃取物对人胃癌SGC-7901细胞增殖存在明显的抑制作用,且随着药物浓度的增加,其抑制作用逐步增强,呈明显的剂量-效应关系。100μg/ml浓度组对SGC-7901细胞增殖的抑制作用较低,抑制率为3.61%;随着给药浓度的增加,抑制作用明显增强,在200μg/ml,300μg/ml,400μg/ml,500μg/ml,600μg/ml时,其抑制率分别达6.67%,33.29%,43.75%,87.54%,91.76%。经统计学处理,300μg/ml,400μg/ml,500μg/ml,600μg/ml浓度组与对照组比较均存在非常显著性差异(P﹤0.01)。IC50为339.71μg/ml。 3、不同浓度的蛇六谷石油醚萃取物作用于人胃癌 SGC-7901细胞24h能明显下调survivin蛋白的表达,其中200ug/ml,300ug/ml浓度组与对照组比较有显著差异(P<0.05),400ug/ml,450ug/ml浓度组与对照组比较有非常显著差异(P<0.01)。 4、不同浓度的蛇六谷石油醚萃取物作用于人胃癌SGC-7901细胞24h后,能明显上调促凋亡蛋白Bax的表达,其中200ug/ml,300ug/ml,400ug/ml浓度组与对照组比较有显著差异(P<0.05),450ug/ml浓度组与对照组比较有非常显著差异(P<0.01)。 5、不同浓度的蛇六谷石油醚萃取物作用于人胃癌SGC-7901细胞24h后,能明显下调凋亡抑制蛋白Bcl-2蛋白的表达,其中300ug/ml,450ug/ml浓度组与对照组比较有显著差异(P<0.05),400ug/ml浓度组与对照组比较有非常显著差异(P<0.01)。 6、不同浓度的蛇六谷石油醚萃取物作用于人胃癌SGC-7901细胞24h后,能明显上调Cleaved-Caspase-9蛋白酶的表达,其中200ug/ml,300ug/ml,400ug/ml,450ug/ml浓度组与对照组比较有非常显著差异(P<0.01)。 结论: 1、蛇六谷石油醚萃取物对人胃癌SGC-7901细胞有明显的体外生长抑制作用,且呈明显的剂量-效应关系。 2、蛇六谷石油醚萃取物诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡的可能机制有:下调凋亡抑制蛋白survivin的表达;下调Bcl-2蛋白、上调Bax蛋白的表达,降低两者比值,同时上调Cleaved-Caspase-9蛋白的表达,从而启动凋亡的线粒体途径。