目的:糖尿病（Diabetes mellitus,DM）是我国的一大慢性疾病,其特征是胰岛素抵抗（Insulin resistance,IR）或分泌缺陷所导致的糖代谢障碍,机体血糖水平升高。持续性高血糖是许多代谢性疾病的关键危险因素。骨骼肌是机体维持血糖稳态的主要场所。在胰岛素刺激下,骨骼肌主要通过磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B（Phosphatidylinositol-3-kinase/Akt kinases,PI3K/AKT）信号通路来促使机体摄取葡萄糖。孤核受体4A1（Orphan nuclear receptor 4A1,NR4A1）是一种核受体,已有较多研究证明NR4A1能通过多种信号途径参与机体的糖代谢调控。NR4A1参与糖代谢的调控,而PI3K/AKT信号通路是胰岛素作用下糖代谢的主要调节通路,二者均在糖代谢中发挥重要的作用。因此本研究以C2C12肌管细胞为实验对象,毒胡萝卜素（Thapsigargin）构建糖代谢损害模型,探讨NR4A1与PI3K/AKT信号通路之间是否存在相关性,从而影响C2C12肌管细胞的糖代谢。研究方法:实验一:（1）体外培养的C2C12细胞诱导0-6天,分别在第0、2、4、6天收集细胞,q PCR检测不同时间点肌管细胞分化标志物成肌分化抗原（Myogenic differentiation Antigen,Myo D）和肌细胞生成素（Myogenin,Myo G）,以及NR4A1的表达情况。（2）分化的C2C12肌管细胞分为NC组、胰岛素组。无血清培养基饥饿6h,胰岛素组加入20n M胰岛素刺激10min,NC组加入溶剂PBS处理10min。Western blot检测PI3K与AKT蛋白的磷酸化水平。（3）分化的C2C12肌管细胞设置不同毒胡萝卜素浓度梯度处理24h,CCK-8检测细胞活力,筛选出对细胞活力无明显影响的浓度进行后续实验。（4）分化的C2C12肌管细胞分为NC组、无水乙醇溶剂组、毒胡萝卜素组。NC组不做特殊处理,无水乙醇溶剂组加入溶剂无水乙醇作对照,毒胡萝卜素组加入1μM毒胡萝卜素,各处理24h。18h后更换为无血清培养基饥饿6h,最后加入20n M胰岛素刺激10min。葡萄糖试剂盒检测葡萄糖消耗水平,Western blot检测NR4A1、p-PI3K、p-AKT表达情况。实验二:（1）过表达NR4A1慢病毒和空载慢病毒感染C2C12细胞,加入嘌呤霉素进行筛选,得到过表达NR4A1的C2C12细胞,命名为Ad-NR4A1,以及对应的Ad-NC。荧光显微镜下观察荧光,q PCR、Western blot方法验证感染效率。（2）筛选后的细胞分为Ad-NC组、Ad-NC+毒胡萝卜素组、Ad-NR4A1+毒胡萝卜素组,分化至第6天。换液后Ad-NC组加入溶剂无水乙醇,Ad-NC+毒胡萝卜素组、AdNR4A1+毒胡萝卜素组加入1μM毒胡萝卜素,各处理24h。18h后更换为无血清培养基饥饿6h,最后加入20n M胰岛素刺激10min。葡萄糖试剂盒检测葡萄糖消耗水平,Western blot检测NR4A1、p-PI3K、p-AKT表达情况。结果:实验一:（1）C2C12细胞诱导4-6天后可见大部分细胞分化为肌管细胞。q PCR结果表明Myo D、Myo G随分化时间延长表达逐渐增加（p均＜0.01）,在分化后的肌管细胞中NR4A1的表达量显著升高（p＜0.01）。（2）胰岛素刺激C2C12肌管细胞后,PI3K/AKT通路被激活（p＜0.01）。（3）CCK-8检测结果显示,毒胡萝卜素浓度在0.2-1μM时,细胞活力无明显变化（p＞0.05）。浓度大于1μM时（2μM、6μM）,细胞活力开始下降（p均＜0.01）。（4）与NC组比,无水乙醇对葡萄糖消耗、NR4A1表达、PI3K/AKT通路改变无明显影响（p均＞0.05）。与无水乙醇组相比,毒胡萝卜素处理后葡萄糖消耗减少,NR4A1表达水平下降,p-PI3K、pAKT受到抑制（p均＜0.01）。实验二:（1）成功构建过表达NR4A1的C2C12细胞。荧光提示病毒感染成功,Western blot、q PCR表明Ad-NR4A1组NR4A1表达较Ad-NC组显著上调（p均＜0.01）。（2）与Ad-NC+毒胡萝卜素组相比,Ad-NR4A1+毒胡萝卜素组胰岛素刺激后葡萄糖消耗增加（p＜0.05）,p-PI3K、p-AKT信号通路活化（p＜0.05、p＜0.01）。结论:1.毒胡萝卜素抑制C2C12肌管细胞葡萄糖代谢。2.NR4A1对毒胡萝卜素诱导的C2C12肌管细胞葡萄糖代谢障碍具有改善作用,其机制可能是通过PI3K/AKT信号途径发挥作用。