波形蛋白干扰RNA对人脑胶质瘤的影响

来源 :内蒙古医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zzh19860525anan
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目的:探讨应用RNA干扰技术敲除波形蛋白(Vimentin,VIM),在人脑胶质瘤细胞中表达及其对细胞增殖、侵袭、转移等生物学方面的作用,同时也为今后对于胶质瘤疾病的靶向基因治疗等方面提供相应的理论依据。方法:首先利用siRNA(Small interfering RNA,小干扰RNA)设计原则合成VIM干扰RNA的真核表达载体,同时进行测序予以证实。在细胞实验中利用脂质体法转染合成成功的真核表达载体到胶质瘤U251细胞株。利用RT-qPCR(Reverse transcription–qPCR,反转录实时定量PCR)方法检测U251细胞经VIM RNAi(RNA interference,RNA干扰)干扰后VIM的mRNA表达量。将波形蛋白干扰组设为实验组,对照组为转染siRNA阴性对照序列组。最后分别采用MTT法、细胞划痕试验及Transwell小室侵袭试验的方法,观察干扰后肿瘤细胞生长、侵袭及转移能力的改变,实验结果进行对比,从而得出一定的结论。结果:1、成功合成出VIM干扰RNA真核表达载体,并通过检验符合GeneBank数据库序列,并采用脂质体法转染进入至培养的人脑胶质瘤细胞中。2、转染VIM RNAi的一组设立为实验组,对照组为转染阴性对照序列的一组。3、MTT结果表明,与对照组对比,实验组细胞增殖能力降低,有统计学意义(P<0.05);通过Transwell小室侵袭试验可看出实验组细胞侵袭能力较低,有统计学意义(P<0.05);并且采用细胞划痕实验观察到实验组细胞转移能力相对减弱,有统计学意义(P<0.05)。结论:利用RNA干扰技术成功合成出VIM干扰RNA真核表达载体,使得波形蛋白表达受到抑制,抑制后的人脑胶质瘤细胞生长、侵袭及转移等生物学能力均与对照组对比有所降低。可见,更深的探索应用RNAi技术敲除波形蛋白在今后人脑胶质瘤治疗方面提供了新的思路。
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