乌鳢IgT调节肠道炎症性损伤的机制研究

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近几十年来,随着人们生活水平的提高,鱼类养殖业也得到了迅速的发展,但日渐增多的鱼类疾病给人类带来了一定的威胁。鱼类在与外界病原和生态环境之间的相互作用过程中,主要依靠其免疫系统抵御外界病原侵染。硬骨鱼类的免疫器官和组织主要包括胸腺、肾脏、脾脏和黏膜相关淋巴组织,首先接触水中病原的黏膜相关淋巴组织是鱼类抵抗外界病原入侵的第一道防线。目前,虹鳟、鲑及鲤科鱼类的黏膜免疫研究较广泛,而关于乌鳢等鱼类免疫学研究鲜有报道。本研究对乌鳢IgT和pIgR基因进行扩增和鉴定,并分析其结构特征。进一步检测IgT、Ig M和pIgR在肝、脾、肾、肠和鳃组织中的分布规律。结果表明,IgT基因含有4个典型的重链恒定区和6个糖基位点,且与虹鳟和鲑鱼的同源性较高。pIgR基因含有2个免疫球蛋白结构域,且与哺乳动物pIgR基因的ILD1和ILD5结构域相似。进化分析表明乌鳢pIgR基因与牙鲆鱼的进化关系较近。组织分布表明,pIgR基因在各组织中均有表达,IgT基因在黏膜组织中具有较高的表达水平。为进一步探究IgT在调节肠道炎症性损伤中的作用,本研究选择鱼类致病菌维氏气单胞菌(Aeromonas veronii)和嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila),采用浸泡和肛注两种感染途径,建立乌鳢气单胞菌感染模型。经病理组织学验证,感染后的乌鳢各组织均有不同程度病变,7 d时病变特征最为明显,14 d后逐渐缓解。为进一步探究黏膜免疫球蛋白及其受体的分布情况,经免疫印迹检测结果显示,在乌鳢的肠黏液、鳃黏液和皮肤黏液中均检测到IgT和pIgR的表达,而Ig M主要在血清中表达。利用荧光定量PCR检测了感染后乌鳢各组织中免疫相关基因的表达水平,并在组织中检测了IgT+B细胞和pIgR+B细胞的表达情况,进一步对肠道内的共生菌进行检测,探究感染后乌鳢肠道菌群的变化。综上所述,本研究克隆了乌鳢IgT和pIgR基因并对其进行生物信息学分析。将A.veronii和A.hydrophila分别以浸泡和肛注的途径感染乌鳢,建立乌鳢气单胞菌感染模型,探究黏膜免疫球蛋白及其受体的分布与表达水平,初步揭示乌鳢黏膜组织中IgT+B淋巴细胞的功能及细菌性感染对乌鳢肠道菌群结构的影响。为鱼类细菌性疾病疫苗的研究提供技术支持。
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