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张仲景用药具“生熟异用”特点,在药物的炮制方法及用法上有独到之处。附子是常用的有毒中药,《伤寒杂病论》对其中使用的附子有“生”和“炮”两种,与现行药典附子均为经胆巴液浸泡后炮制加工为黑顺片、白附片、淡附片和炮附片供临床使用有本质区别。本项目模拟张仲景的方法,制备生、“炮”附子饮片,以药典炮附片为对照,通过基于物质基础的张仲景附子生用和炮用的科学内涵的阐释,对附子有别于现版药典的经方炮制方法作出客观评价,为中药炮制技术的传承及创新提供实验数据支撑。为了最大程度地还原张仲景所用附子,本研究首次将张仲景主要生活及行医所在地——南阳的野生附子与江油栽培附子进行对比研究。一、附子生用科学内涵的研究采用称重法,对张仲景《伤寒杂病论》中附子的用量“枚”进行客观量化研究确认。分别将江油生附子和南阳生附子按照大中小分三档,每档15枚,对每枚附子鲜品和干品进行称重。结果:江油、南阳的附子的鲜品干燥后的干湿比基本一致,分别为0.37±0.03,0.38±0.13。河南南阳附子大、中、小档的重量分别为5.1g、3.0g、1.3g,四川江油各档附子的重量比河南南阳附子高约3.3-4.4倍。由于采挖过程中发现大档附子较少,而小档附子可能尚“不足气,不堪用”,推测张仲景所用南阳附子多为中档,即《伤寒杂病论》中附子用量每枚应为现代的3.0g左右,结论:南阳野生附子明显小于四川江油栽培附子,张仲景所用附子一般每枚重量约为3g。张仲景《伤寒杂病论》附子去皮科学内涵的研究。对比江油与南阳附子的附子皮占附子总重的比例,检测含水量和3种单酯型、3种双酯型生物碱含量。结果:江油、南阳的附子皮中3种单酯型生物碱总量分别为0.0064%、0.0186%,均低于去皮附子的0.0159%、0.0276%,也低于带皮附子的0.0181%和0.0243%;3种双酯型生物碱总量分别为0.3220%、0.8793%,均高于去皮附子的0.1251%、0.6853%,也高于带皮附子的0.1698%和0.5660%。江油附子皮约占附子总重的10%,而其所含双酯型生物碱总量占到整个附子的近19%;南阳附子皮约占总重的11%,而其所含双酯型生物碱总量占到整个附子的17%左右。结论:附子生用去皮的目的可能是为了降低毒性。二、张仲景《伤寒杂病论》附子“炮”法的挖掘与创新研究。以江油生附片为炮制对象,应用色差仪、质构仪、高效液相色谱仪,以外观性状（颜色、质地——“内外皆黄”、“坼”）、化学成分（单、双酯型生物碱含量,7种水溶性生物碱含量）、操作简便性等为考察指标,从古代干热法、现代烘烤法、清炒法和砂烫法中筛选具有张仲景时期的附子“炮”法相同质量的炮制方法。颜色方面肉眼观察与色差仪检测结果一致,砂烫法和现代烘烤法可达到内外皆黄,且同一批次及不同批次饮片之间的外观性状较接近。清炒法易炒至外焦内生,局部出现焦斑,饮片与粉末差异大。古代干热法重现性较差。质地方面手掰感官与质构仪检测结果一致,现代烘烤法与砂烫法的最大剪切力明显小于古代干热法和清炒法,且不同批次之间RSD值更小,说明炮制出的饮片更酥脆,工艺重现性更好。古代干热法、现代烘烤法、清炒法和砂烫法所制备炮制品双酯型生物碱含量较生品的0.1698%分别降低88.9%、90.5%、91.8%、93.5%,说明4种炮制品较生品毒性均有大幅降低,但古代干热法部分炮制品和清炒品口尝无麻舌感,说明这两种方法存在炮制过度的情况。4种炮制品的单酯型生物碱含量较生品的0.0181%增加297.2%、255.2%、368.0%、385.6%。生附子中7种水溶性生物碱的总量为0.1470%,炮制后除烘制品增加41.8%外,其它3种炮制品分别降低39.6%、52.7%、41.5%。应用综合评分法对4种方法进行比较,结果现代烘烤法0.9197＞砂烫法0.8725＞清炒法0.7212＞古代干热法0.6629。结论:现代烘烤法与砂烫法均能够达到张仲景时期附子“炮”的外观性状,且能减毒增效,砂烫法简便易行,便于控制质量三、张仲景“炮”附子与药典炮附片的比较研究。黑顺片中单、双酯型生物碱,7种水溶性生物碱总量分别为0.0348%、0.0067%、0.0005%,砂烫为炮附片之后单酯型降低65.2%,双酯型则未检出,水溶性生物碱含量增至0.0018%。江油生附片中单、双酯型生物碱,水溶性生物碱含量分别为0.0181%、0.1698%、0.1470%,砂烫为“炮”附子后,单酯型生物碱含量增加168.0%,双酯型生物碱含量降低89.2%,水溶性生物碱含量降低41.5%。南阳生附片中单、双酯型生物碱,水溶性生物碱总量分别为0.0243%、0.5660%、0.1460%,砂烫为“炮”附子后,单酯型生物碱含量增加1028.4%,双酯型生物碱含量降低2371.6%,水溶性生物碱含量降低20.1%。再对6种饮片的指纹图谱进行比较,生附子的脂溶性特征图谱共有峰11个,砂烫为“炮”附子后增至19个,且3种单酯型生物碱均增加210%以上。3批黑顺片有5个共有峰,砂烫为炮附片后,共有峰减少至4个,苯甲酰次乌头原碱增加约83.9%,乌头碱在炮附片中未检出,其余两个共有峰峰面积差异不明显。生附片的水溶性特征图谱有共有峰23个,砂烫为“炮”附子后,共有峰增至29个,总峰面积增加7.3%以上。黑顺片共有峰为38个,砂烫为炮附片后,共有峰增至47个,总峰面积虽增加75.6%,但2者的总峰面积均远低于生附子和“炮”附子。采用超高效液相与离子阱轨道组合高分辨质谱联用技术系统对6种饮片中的化学成分进行进一步分析。检测到江油生附片中有成分81个,砂烫为“炮”附子后10个成分消失,新增26个成分;南阳生附子中有成分80个,砂烫为“炮”附子后16个成分消失,新增34个成分;黑顺片中有成分34个,砂烫为炮附片后12个成分消失,新增19个成分。与炮附片相比,“炮”附子成分流失少,且离子丰度高。通过上述研究发现,“炮”附子相较炮附片,双酯型生物碱总量虽高于炮附片,但较生品均有大幅降低,单酯型生物碱为炮附片的7倍以上,7种水溶性生物碱总量达47倍以上。成分种类更多,说明与炮附片相比,“炮”附子能更好地达到减毒增效的目的,张仲景“炮”法具有其优势。综上所述,附子生用去皮可能是为了降低毒性,而“炮”法能在降低毒性的同时增加有效成分含量,值得深入研究。