【摘 要】
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瓜实蝇Zeugodacus cucurbitae是一种重要的入侵害虫,成虫产卵于果实内,孵化后的幼虫在果实内部危害致使瓜果品质下降,造成瓜类蔬菜经济价值大幅下跌。本研究首先通过药膜法测定3种杀虫剂对瓜实蝇4个寄主种群成虫的毒力,其次测定在甲氨基阿维菌素苯甲酸盐(简称:甲维盐)和啶虫脒亚致死剂量处理后,4个寄主种群成虫体内谷胱甘肽硫转移酶(Glutathione S-transferase)和羧酸酯
【基金项目】
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中国农业科学院&广西农业科学院科技创新工程协同创新任务(CAAS-GXAAS-XTCX2019026-03); 广西创新驱动发展专项资金项目(桂科 AA20108002);
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瓜实蝇Zeugodacus cucurbitae是一种重要的入侵害虫,成虫产卵于果实内,孵化后的幼虫在果实内部危害致使瓜果品质下降,造成瓜类蔬菜经济价值大幅下跌。本研究首先通过药膜法测定3种杀虫剂对瓜实蝇4个寄主种群成虫的毒力,其次测定在甲氨基阿维菌素苯甲酸盐(简称:甲维盐)和啶虫脒亚致死剂量处理后,4个寄主种群成虫体内谷胱甘肽硫转移酶(Glutathione S-transferase)和羧酸酯酶(Carboxylesterase)活性,最后通过对甲维盐LC25处理组与对照组4个寄主种群成虫进行转录组测序及分析,研究结果为瓜实蝇耐药性治理提供理论依据。主要研究结果如下:1.室内生物测定结果表明,瓜实蝇4个寄主种群对甲维盐的耐药程度依次为节瓜<苦瓜<丝瓜<黄瓜,其中节瓜、苦瓜较不耐药,其次是丝瓜、黄瓜,LC50值分别为0.250 mg/L、0.391 mg/L、0.809 mg/L、1.035 mg/L。对多杀菌素的耐药情况依次为黄瓜、节瓜、丝瓜、苦瓜,LC50值分别为1.157 mg/L、1.198 mg/L、1.232 mg/L、2.029 mg/L。对啶虫脒的耐药程度表现为苦瓜<节瓜<黄瓜<丝瓜,LC50值分别为17.946 mg/L、20.166 mg/L、20.190 mg/L、21.986 mg/L,其中对甲维盐的耐药性差异幅度最大,为4.140倍,对多杀菌素和啶虫脒的耐药性差异幅度较小,分别为1.754和1.225倍。表明取食不同寄主植物影响瓜实蝇对杀虫剂的耐药性。2.酶活性测定结果显示,甲维盐和啶虫脒LC50、LC25胁迫下瓜实蝇4个寄主种群体内GSTs和Car E活性变化明显,GSTs、CarE与两种杀虫剂在瓜实蝇体内的解毒代谢密切相关。在甲维盐、啶虫脒处理组和对照组中,4个寄主种群雌雄成虫体内两种解毒酶活性存在一定差异,表明性别会影响成虫体内解毒代谢。甲维盐亚致死剂量对4个寄主种群成虫体内GST活性具有一定诱导作用,LC25甲维盐对GST的诱导效果强于LC50,GSTs酶过量表达有助于增加4个寄主种群对甲维盐的抗性。随着甲维盐处理剂量增加,对成虫体内Car E活性诱导作用增强。啶虫脒亚致死剂量处理后,短时间即抑制苦瓜种群雌虫GST活性、同时也能抑制黄瓜种群雌雄虫、丝瓜和苦瓜雄虫体内的Car E活性,处理剂量越低抑制效果越显著。啶虫脒亚致死剂量对节瓜种群雌雄成虫、丝瓜种群雌虫、黄瓜和苦瓜种群雄虫体内GST和Car E活性存在一定诱导作用,表明这两种酶均参与4个寄主种群防御新烟碱类杀虫剂的过程。对照组结果显示长期用4种瓜类饲喂瓜实蝇,成虫体内两种解毒酶活性表达存在差异,即短时间内取食黄瓜后成虫体内两种解毒酶活性要显著高于取食节瓜和丝瓜的,表明寄主植物长期饲养影响瓜实蝇成虫体内解毒酶活性,并且随寄主不同有所差异。3.转录组分析结果表明,对照组和处理组相比,丝瓜种群雌虫体内上调数目是下调基因的1.557倍,节瓜种群雄虫体内下调基因是上调基因数目的2.207倍,推测可能与瓜实蝇4个寄主种群对甲维盐耐药性存在差异有关。同一LC25处理组内,节瓜和丝瓜两种群雌虫比上调的差异基因890个,下调的差异基因1911个、黄瓜和丝瓜雌虫两种群比较上调的差异基因850个,下调的差异基因1866个、苦瓜和丝瓜两种群雌虫比较上调的差异基因1369个,下调的差异基因2218个,上调基因数目显著低于下调基因,但在雄虫中未发现该现象。GO富集分析表明,部分差异基因主要富集于水解酶、氧化还原酶活性、DNA结合等分子功能,部分基因富集到氧化还原和解毒代谢过程等生物学功能,结果表明瓜实蝇应对甲维盐胁迫时与酶学催化反应、调控代谢和氧化还原等代谢相关。KEGG分析结果表明差异基因富集的主要通路为Toll和Imd信号通路、代谢通路和生物合成通路。结果进一步说明与解毒代谢和新陈代谢相关基因在瓜实蝇应对甲维盐胁迫时发挥重要作用。通过实时荧光定量PCR(Real time quantitative PCR,RT-qPCR)验证了随机挑选的差异基因在瓜实蝇4个寄主种群处理组和对照组的相对表达量,与转录组测序结果趋势一致。
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