牛传染性鼻气管炎病毒属牛疱疹病毒I型(Bovine Herpesvirus-1，BHV-1)，在分类上属于疱疹病毒科的甲疱疹病毒亚科。BHV-1感染牛可呈现牛传染性鼻气管炎(Infectious bovine rhino-tracheitis，IBR)和牛传染性化脓性外阴阴道炎(Infectious pusular vulvovaginitis，IPV)两种临床型。IBRV被国际动物卫生组织(OIE)列为B类疫病。在我国进出境动物检疫以及活牛与牛遗传物质的国际贸易中，该病是重点检疫的疫病。 本论文针对IBR/IPV疫病防治以及进出口检疫需求，以IBRV Bartha Nu/67株为研究对象，根据GenBank中注册的BHV-1gC基因设计特异性引物gCup/gCdn，采用聚合酶链式反应(PCR)技术成功扩增得到包含编码病毒gC糖蛋白的基因片段，大小为1630 bp，将其克隆至T载体pMD20-T中，成功构建了重组质粒pMD20-T-gC，并进行序列测定。利用NCBI中的Blast程序和DNAStar软件对所测定的序列进行比较和分析，确定gC基因的阅读框架正确，全长为1563bp，编码521个氨基酸。与GenBank收录的其他BHV-1病毒株gC基因进行比较，发现核苷酸序列相似性在98.3％～99.8％之间，推导氨基酸相似性在97.8％～99.4％之间。同时对gC基因推导氨基酸进行生物信息学分析，IBR gC糖蛋白的B细胞表位可能位于N端氨基酸残基第10～48位、72～85位、110～161位、180～207位、250～290位、386～404位和455～510位等7个区域内或其附近，它们的抗原性指数均较高，成为主要的抗原表位的可能性较大。 根据测定的Bartha Nu/67株gC基因序列和生物信息分析结果设计一对引物gCdF/gCd R，以pMD20-T-gC为模板进行PCR扩增，获得编码gC糖蛋白抗原活性区(第15～177位氨基酸)的gCd基因片段，该片段理论长度为489bp，编码163个氨基酸。将gCd插入原核表达载体pET32a，成功地构建重组表达质粒gCd-pET32a。限制性内切酶鉴定以及序列测定表明重组表达质粒克隆片段序列正确地插入到载体中。对重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)的IPTG诱导产物进行SDS-PAGE电泳，可检测到分子量约44 KD的目的蛋白，IPTG诱导6 h后表达量达到最高。免疫印迹实验结果证实，重组蛋白TrxA-gCd与IBR标准阳性血清能够发生特异性反应，表明gC糖蛋白抗原活性区在原核中获得了表达并具有良好的免疫反应性。对获得的融合蛋白TrxA-gCd进行可溶性分析，其可溶性好，裂解上清蛋白占总蛋白的40.1％，裂解沉淀融合蛋白占28.6％。该重组蛋白可用镍柱亲和层析方法进行非变性纯化，并将其作为抗原以建立EIASA等免疫诊断方法。将纯化的TrxA-gCd融合蛋白作为诊断抗原，建立了检测IBR的ELISA方法，用于检测gC糖蛋白IgG抗体。为减少实验误差，使得实验结果更加准确可靠，本实验纯化了pET32a载体伴侣蛋白硫氧还原蛋白(thioredoxin，Trx)作为对照抗原，以ODcorr来表示实验结果，以消除血清中可能存在的大肠杆菌非特异性影响。实验结果表明本论文建立的gCd-ELISA方法具有很好的特异性和敏感性，与其他牛病阳性血清不发生交叉反应，血清稀释倍数为1：100。用本实验建立的gCd-ELIJSA、两种进口EIASA试剂盒(S-kit和P-kit)和血清中和(serum neutralization)对同一批218份牛临床血清进行检测，阳性检出率分别为59.17％、56.42％、67.00％、59.63％，阳性检出率的变异系数为7.5％。gCd-EL,ISA、S-kit和P-kit与SN阳性符合率分别为86.92％、90.00％、97.69％；阴性符合率为81.81％、93.18％、78.4.1％。用本实验建立的gCd-ELISA方法对随机抽取590份临床牛血清样进行检测，阳性检出率为44.58％。用SN方法检测，阳性检出率50.67％。两者之间的阳性符合率为符合率为87.07％。以上结果表明，本实验建立的gCd-ELISA方法跟进口EIASA检测试剂盒和SN准确性相当，这对本国IBR的防控和鉴别诊断具有重大意义。