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大肠杆菌温度诱导表达系统已经被广泛用于生产多种重组蛋白,但外源蛋白几乎都以包涵体的形式积累在胞质当中,不能以活性蛋白的形式分泌到周质或培养基中。本研究采用一株大肠杆菌BL21(DE3)[pBLMVL2EGF],其中人表皮生长因子(hEGF)表达由PL启动子控制并通过phoA信号肽分泌到胞外。本课题详细研究了这个表达系统的特点,并通过补料分批发酵进一步提高胞外hEGF的生产水平。
在分批发酵中,升温诱导后细胞生长出现延迟是外源基因表达造成的,而不是由升温引起的;随着诱导温度的提高,hEGF的比生产速率增加,分泌效率下降,当诱导温度为38℃,分泌效率最大(45.4%);在补料分批发酵中,诱导前的营养状态影响了诱导后的hEGF表达速率;在诱导前营养状态相同的情况下,不同的葡萄糖比消耗速率影响了hEGF的表达和分泌。通过高密度发酵,诱导结束时OD600达到67.5,胞外最高的hEGF浓度为380mg/L,占总hEGF的39.6%。