【摘 要】
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研究背景:宫颈癌是全球女性第三大、中国女性第二大最常见的癌症,也是全球内妇科肿瘤相关性死亡的主要原因,严重危害女性健康。目前同步放化疗和近距离治疗是宫颈癌标准治疗方案的重要组成部分,但仍然有部分患者由于放疗抵抗导致治疗失败。Long non-coding RNA（lncRNA）是一种本身不编码蛋白,转录本长度超过200bp的长链非编码RNA,是人体中主要的转录产物。它可通过m RNA剪切、表观遗传
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研究背景:宫颈癌是全球女性第三大、中国女性第二大最常见的癌症,也是全球内妇科肿瘤相关性死亡的主要原因,严重危害女性健康。目前同步放化疗和近距离治疗是宫颈癌标准治疗方案的重要组成部分,但仍然有部分患者由于放疗抵抗导致治疗失败。Long non-coding RNA（lncRNA）是一种本身不编码蛋白,转录本长度超过200bp的长链非编码RNA,是人体中主要的转录产物。它可通过m RNA剪切、表观遗传沉默、lncRNA-mi RNA相互作用,参与调控包括基因表达、转录和细胞增殖等生物学过程。多项研究显示,lncRNA在宫颈癌的发生、发展和预后等过程发挥着重要作用,尤其是放化疗抵抗及肿瘤复发的机制研究成为宫颈癌研究的热点。研究目的:本课题组前期通过对26例局部晚期宫颈癌患者组织进行全外显子测序,进行生存分析发现7个差异基因与患者的RFS（recurrence free survival）密切相关。本研究拟在相同筛选条件的独立样本中验证上述基因表达,并通过体外实验进一步探究上述基因与宫颈癌放疗敏感性的相关性,以及探究其潜在的机制,为临床预测患者放疗敏感性提供新的靶点,为提高生存率、改善预后提供新思路。研究方法:本研究纳入了2015年至2017年Ⅱb-IVa期并经过根治性放化疗的宫颈癌患者66例,分为早复发（放疗抵抗）和晚复发组（放疗敏感）,采用q RT-PCR验证差异基因的表达。选取人宫颈癌细胞系He La和Ca Ski细胞,在两种细胞系中通过q RT-PCR检测上述基因的表达差异。选取细胞进行慢病毒转染,对基因进行敲低及过表达。通过克隆形成实验、划痕实验、蛋白印迹、流式周期与凋亡实验探究基因与宫颈癌细胞放疗敏感性的关系。研究结果:（1）在66个患者独立样本验证发现CTD-2292M14.1基因表达在早复发患者组表达显著升高（p＜0.05）。并且在He La细胞中表达高于Ca Ski细胞（p＜0.05）,选取He La细胞构建慢病毒稳定转染细胞株。（2）LV-CTD-He La细胞中CTD-2292M14.1的表达明显高于对照组（p＜0.05）,照射处理后存活分数升高（p＜0.05）,LV-CTD-RNAi-He La细胞中CTD-2292M14.1的表达显著低于对照组（p＜0.05）,照射处理后存活分数降低（p＜0.05）。说明CTD-2292M14.1的过表达降低了宫颈癌细胞对放疗的敏感性。（3）经过照射处理的LV-CTD细胞组的划痕愈合及增殖速率较control组相比显著增加（p＜0.05）,而照射处理的LV-CTD-RNAi细胞组划痕愈合及增殖速率较control组降低（p＜0.05）。CTD-2292M14.1的过表达增加了照射后宫颈癌细胞的增殖和迁移。（4）通过流式凋亡检测发现CTD-2292M14.1的过表达不能抑制照射后宫颈癌细胞的凋亡。（5）通过流式周期检测发现LV-CTD+8Gy较control+8Gy的S期细胞明显增多（p＜0.05）,细胞从G1进入S期。LV-CTD-RNAi+8Gy较control+8Gy组的G1期细胞显著增加（p＜0.05）,表现为G1期阻滞。CTD-2292M14.1的过表达促进了照射后宫颈癌细胞的周期进程。（6）照射处理后各组细胞LC3、P62蛋白的表达差异无明显相关,而p-AMPK/AMPK及p-LKB1/LKB1在LV-CTD+8Gy组表达较LV-CTD组升高（p＜0.05）,表明CTD2292M14.1调节宫颈癌的放疗敏感性与AMPK/LKB1通路有关。研究结论:CTD2292M14.1可能通过AMPK/LKB1通路影响宫颈癌的增殖、迁移、周期,从而调节宫颈癌的放疗敏感性。
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