香鱼可溶性FcγR同源基因对脾细胞产生IgM抗体抑制作用的研究

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Fc受体(fragment crystallized receptor,FcR)是免疫细胞表面一类重要的受体分子,其通过与抗体Fc段(fragment crystallized,Fc)结合后发挥调理吞噬,清除免疫复合物,介导免疫抑制等多种生物学功能。哺乳动物FcR已有较广泛的研究基础,而鱼类FcR鲜少报道。近年来研究显示硬骨鱼类中不存在典型FcR,只存在一类可溶性FcR样蛋白。本研究在香鱼(Plecoglossus altivelis,ayu)单核巨噬细胞转录组中发现一种编码可溶性FcγR同源蛋白的基因,将其命名为PaFcγRl。蛋白结构预测显示,PaFcγRl不含有跨膜区与胞内段,其结构包含2个C2型Ig样结构,这两个结构域内均包含一对半胱氨酸残基,此特征在各物种FcR中十分保守。系统进化分析的结果表明,PaFcγRl与罗非鱼(Oreochromis niloticus,Nile tilapia)和青鳉(Oryzias latipes,Japanese ricefish)的同源基因亲缘关系最为相近。实时荧光定量PCR结果显示PaFcγRl基因mRNA主要在健康香鱼的鳃、肾和脾组织中表达,但表达量较低。在鳗弧菌(Vibrio anguillarum)感染后,香鱼四个免疫组织中PaFcγRl基因mRNA表达量均显著上调,表明该基因的表达与鳗弧菌感染紧密相关。采用原核表达的方式获得PaFcγRl重组蛋白(recombinant PaFcγRl,rPaFcγRl)并制备其小鼠抗血清。Western blot技术检测结果表明PaFcγRl为N连接糖蛋白。在HEK293细胞中表达PaFcγRl,Western blot检测其分泌至胞外,表明其为分泌型蛋白。在HEK293细胞表达改造后的膜结合香鱼IgM(PaIgM)重链,流式细胞术检测显示rPaFcγRl能与香鱼IgM的Fc部分结合,表明其与PaIgM存在相互作用。溶血空斑实验结果显示rPaFcγRl能抑制香鱼脾细胞对绵羊红细胞(sheep red blood cell,SRBC)体外初次免疫抗体产生,且表现出剂量相关性。综上所述,PaFcγRl可能对香鱼脾细胞产生IgM抗体存在负向调控作用。
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