【摘 要】
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CC型趋化因子2（CC Chemokine ligand2，CCL2）又被称为单核细胞趋化蛋白-1（monocyte chemoattractant protein1，MCP-1），是哺乳动物中调节单核/巨噬细胞（monocytes/macrophages，MO/MФ）迁移和浸润的关键趋化因子之一。然而，CCL2在鱼类中的功能尚未明确。本研究从香鱼（Plecoglossus altivelis）M
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CC型趋化因子2（CC Chemokine ligand2，CCL2）又被称为单核细胞趋化蛋白-1（monocyte chemoattractant protein1，MCP-1），是哺乳动物中调节单核/巨噬细胞（monocytes/macrophages，MO/MФ）迁移和浸润的关键趋化因子之一。然而，CCL2在鱼类中的功能尚未明确。本研究从香鱼（Plecoglossus altivelis）MO/MФ转录组测序结果中获得编码CCL2-like基因（PaCCL2L）的cDNA序列。序列分析显示，PaCCL2L属于CCL2的同源物，并且与墨西哥脂鲤（Astyanax mexicanus）和斑马鱼（Danio rerio）CCL2同源物的同源性最高。PaCCL2L基因mRNA在健康香鱼所有被检组织中均表达，并且在脾中的表达量最高。鳗弧菌（Vibrio anguillarum）感染后，PaCCL2L基因mRNA表达量在重要免疫组织肝、脾和头肾中均显著上调（P＜0.05）。香鱼MO/MФ经鳗弧菌感染后，PaCCL2L基因mRNA的表达量也显著上调（P＜0.05）。通过原核表达、镍柱纯化及尿素梯度复性获得重组PaCCL2L成熟肽蛋白（recombinant PaCCL2L mature peptide，rPaCCL2L），并制备了多克隆抗体（anti-PaCCL2L）。Western blot结果表明，鳗弧菌感染后，PaCCL2L在MO/MФ中蛋白表达量也显著上调（P＜0.05）。整体实验表明，腹腔注射1.0和10.0ng/g的rPaCCL2L后，鳗弧菌感染香鱼的存活率显著上调（P＜0.05），分别为20%和40%，肝、脾和头肾中载菌量也显著降低（P＜0.05）。体外趋化实验表明，1.0和10.0ng/ml的rPaCCL2L能显著诱导香鱼静息态MO/MФ和嗜中性粒细胞的迁移（P＜0.05），其中10.0ng/ml的rPaCCL2L对MO/MФ的趋化活性更好（P＜0.05）；并且1.0和10.0ng/ml的rPaCCL2L能诱导脂多糖（Lipopolysaccharides，LPS）诱导的M1型MO/MФ的迁移（P＜0.05）。体内趋化实验表明，10.0ng/ml的rPaCCL2L能诱导香鱼腹腔中MO/MФ和嗜中性粒细胞数量的增加（P＜0.05）。10.0ng/ml的rPaCCL2L能够显著增加香鱼MO/MФ的吞噬能力、杀菌能力、呼吸爆发和促炎细胞因子（TNF-α、IL-1β、IL-6和IFN-γ）mRNA的表达（P＜0.05），但MO/MФ经anti-PaCCL2L封闭后香鱼MO/MФ的吞噬能力、杀菌能力、呼吸爆发和促炎细胞因子mRNA的表达均受到抑制（P＜0.05）。综上，PaCCL2L可能通过招募免疫细胞、激活MO/MФ的功能发挥抵御鳗弧菌感染的免疫保护作用。
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