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拟穴青蟹（Scylla paramamosain）是我国沿海海域重要的海水经济蟹类，在浙江、福建、广东、广西、海南及台湾等海域皆有分布。近年来，随着市场需求量不断增加，拟穴青蟹的养殖规模不断扩大，同时对其营养和品质要求也逐步提升。本文采用分子生物学方法进行了青蟹属不同物种的鉴定研究，同时对青蟹属以及我国拟穴青蟹不同野生群体营养成分差异进行了比较，分析了氨基酸代谢通路关键基因的表达水平，以期为拟穴青蟹种质鉴定，营养评价，以及资源合理开发提供理论依据。主要研究结果如下：
1.采用高分辨率溶解曲线技术(HRM)成功筛选出1对线粒体特异性引物（CSN9），可同时鉴别拟穴青蟹（S.paramamosain）、锯缘青蟹（S.serrata）、榄绿青蟹（S.olivacea）及紫螯青蟹（S.tranquebarica）4种青蟹。测序分析显示，CSN9产物长度为203bp，24份实验样品中共鉴定出9种单倍型，检测到28个SNP位点，其中发现27个位点发生了碱基转换，1个位点发生了碱基颠换。
2.对4种青蟹属物种肌肉进行了氨基酸及脂肪酸分析：共测定出共测定出19种游离氨基酸和26种脂肪酸。总游离氨基酸含量（TFAA）为135.75~149.65mg/g，种间无显著差异（P＞0.05）。四种青蟹的总游离氨基酸和非必需氨基酸（TNEAA）平均含量分别为（142.94±41.04）mg/g、（135.30±18.22）mg/g，均以榄绿青蟹含量为最高，紫螯青蟹最低；必需氨基酸（TEAA）平均含量为（7.64±1.2）mg/g，以拟穴青蟹含量最高，显著高于锯缘青蟹和紫螯青蟹（P＜0.05）；风味氨基酸平均含量为（75.88±7.24）mg/g，以锯缘青蟹为最高。总脂肪酸含量（TFA）范围为5.98~10.80mg/g，C20:5n-3（EPA）是所有物种中含量最高的脂肪酸，占总脂肪酸的16.17~23.26％；拟穴青蟹在脂肪酸含量上较其余3个种有明显的优势，TFA、饱和脂肪酸（TSFA）、ω3/ω6值及DHA与EPA之和均显著高于其它3个物种（P＜0.05），多不饱和脂肪酸（TPUFA）和不饱和脂肪酸（TUFA）含量均显著高于锯缘青蟹和紫螯青蟹（P＜0.05），且单不饱和脂肪酸（TMUFA）含量显著高于锯缘青蟹和榄绿青蟹（P＜0.05）。聚类热图显示：甘氨酸（Gly）是四种青蟹含量最多的风味氨基酸，其次是脯氨酸（Pro）和丙氨酸（Ala）；EPA是四种青蟹含量最多的多不饱和脂肪酸，DHA（C22:6n3）和ARA（C20:4n6）也是青蟹属含量较为丰富的PUFA。主成分及聚类分析结果表明，锯缘青蟹和紫螯青蟹在氨基酸和脂肪酸的组成与含量上较为相似，与榄绿青蟹和拟穴青蟹区分比较明显。
3.分析了广西钦州（Gq）、福建霞浦（Fx）、浙江温州（Zw）、浙江三门（Zs）、浙江宁海（Zn）、浙江慈溪（Zc）等6个野生群体拟穴青蟹（S.paramamosain）肌肉的氨基酸及脂肪酸组成含量。共测定出19种游离氨基酸和26种脂肪酸。氨基酸含量在80.94~191.39mg/g之间，Gq群体为最高；总脂肪酸含量在7.97~11.38mg/g之间，Zn群体为最高。主要氨基酸为甘氨酸和精氨酸；主要脂肪酸为C20:5n3（EPA），占总脂肪酸含量的平均值为（22.47±5.84）%。各群体风味氨基酸和多不饱和脂肪酸含量丰富，占总氨基酸比例（TDAA/TFAA）和总脂肪酸比例（PUFA/TFA）分别为（53.62±5.43）%和（59.27±5.29）%。Zs群体的必需氨基酸含量及C22:6n3（DHA）均为最高。主成分分析结果表明：各群体的氨基酸与脂肪酸组成与含量相似性与地理距离分布具有一定的相关性，特别是Gq群体，在氨基酸与脂肪酸的分类中与其他群体区分比较明显。各群体风味氨基酸和多不饱和脂肪酸的聚类分析结果均表明：Zw、Zc与Gq群体较为接近，具有较强的甜味；Fx、Zn与Zs群体较为接近，具有较强的香味及不饱和脂肪酸营养价值。
4.通过本实验室拟穴青蟹全长转录组数据库查找获得脯氨酸和天冬氨酸代谢通路关键基因。脯氨酸脱氢酶（PRODH）基因cDNA序列长度为1572bp，开放阅读框（ORF）为1536bp，编码511个氨基酸残基组成的蛋白质，其分子量为55.82KDa，理论等电点为9.19；天冬氨酸氧化酶（DDO）基因cDNA序列长为1044bp，ORF为1023bp，编码340个氨基酸残基组成的蛋白，其分子量为38.54Kda，理论等电点为8.57。6个野生群体拟穴青蟹PRODH和DDO基因表达量分析表明：PRODH在F x群体中表达量最高，且显著高于Zs、Gq和Zn群体（P＜0.05）；DDO在Zn和Fx群体中表达量最高，在Zs群体中表达量最少（P＜0.05）。RODH和DDO基因表达量与6个野生群体拟穴青蟹相应氨基酸含量线性回归分析表明：脯氨酸含量与PRODH相关性极低，天冬氨酸与DDO相关性较低，表明脯氨酸和天冬氨酸在不同群体拟穴青蟹中的含量可能受到其他因素的调控，而非简单的由单一的合成酶或分解酶控制，相关调控机制需进行深入研究。
1.采用高分辨率溶解曲线技术(HRM)成功筛选出1对线粒体特异性引物（CSN9），可同时鉴别拟穴青蟹（S.paramamosain）、锯缘青蟹（S.serrata）、榄绿青蟹（S.olivacea）及紫螯青蟹（S.tranquebarica）4种青蟹。测序分析显示，CSN9产物长度为203bp，24份实验样品中共鉴定出9种单倍型，检测到28个SNP位点，其中发现27个位点发生了碱基转换，1个位点发生了碱基颠换。
2.对4种青蟹属物种肌肉进行了氨基酸及脂肪酸分析：共测定出共测定出19种游离氨基酸和26种脂肪酸。总游离氨基酸含量（TFAA）为135.75~149.65mg/g，种间无显著差异（P＞0.05）。四种青蟹的总游离氨基酸和非必需氨基酸（TNEAA）平均含量分别为（142.94±41.04）mg/g、（135.30±18.22）mg/g，均以榄绿青蟹含量为最高，紫螯青蟹最低；必需氨基酸（TEAA）平均含量为（7.64±1.2）mg/g，以拟穴青蟹含量最高，显著高于锯缘青蟹和紫螯青蟹（P＜0.05）；风味氨基酸平均含量为（75.88±7.24）mg/g，以锯缘青蟹为最高。总脂肪酸含量（TFA）范围为5.98~10.80mg/g，C20:5n-3（EPA）是所有物种中含量最高的脂肪酸，占总脂肪酸的16.17~23.26％；拟穴青蟹在脂肪酸含量上较其余3个种有明显的优势，TFA、饱和脂肪酸（TSFA）、ω3/ω6值及DHA与EPA之和均显著高于其它3个物种（P＜0.05），多不饱和脂肪酸（TPUFA）和不饱和脂肪酸（TUFA）含量均显著高于锯缘青蟹和紫螯青蟹（P＜0.05），且单不饱和脂肪酸（TMUFA）含量显著高于锯缘青蟹和榄绿青蟹（P＜0.05）。聚类热图显示：甘氨酸（Gly）是四种青蟹含量最多的风味氨基酸，其次是脯氨酸（Pro）和丙氨酸（Ala）；EPA是四种青蟹含量最多的多不饱和脂肪酸，DHA（C22:6n3）和ARA（C20:4n6）也是青蟹属含量较为丰富的PUFA。主成分及聚类分析结果表明，锯缘青蟹和紫螯青蟹在氨基酸和脂肪酸的组成与含量上较为相似，与榄绿青蟹和拟穴青蟹区分比较明显。
3.分析了广西钦州（Gq）、福建霞浦（Fx）、浙江温州（Zw）、浙江三门（Zs）、浙江宁海（Zn）、浙江慈溪（Zc）等6个野生群体拟穴青蟹（S.paramamosain）肌肉的氨基酸及脂肪酸组成含量。共测定出19种游离氨基酸和26种脂肪酸。氨基酸含量在80.94~191.39mg/g之间，Gq群体为最高；总脂肪酸含量在7.97~11.38mg/g之间，Zn群体为最高。主要氨基酸为甘氨酸和精氨酸；主要脂肪酸为C20:5n3（EPA），占总脂肪酸含量的平均值为（22.47±5.84）%。各群体风味氨基酸和多不饱和脂肪酸含量丰富，占总氨基酸比例（TDAA/TFAA）和总脂肪酸比例（PUFA/TFA）分别为（53.62±5.43）%和（59.27±5.29）%。Zs群体的必需氨基酸含量及C22:6n3（DHA）均为最高。主成分分析结果表明：各群体的氨基酸与脂肪酸组成与含量相似性与地理距离分布具有一定的相关性，特别是Gq群体，在氨基酸与脂肪酸的分类中与其他群体区分比较明显。各群体风味氨基酸和多不饱和脂肪酸的聚类分析结果均表明：Zw、Zc与Gq群体较为接近，具有较强的甜味；Fx、Zn与Zs群体较为接近，具有较强的香味及不饱和脂肪酸营养价值。
4.通过本实验室拟穴青蟹全长转录组数据库查找获得脯氨酸和天冬氨酸代谢通路关键基因。脯氨酸脱氢酶（PRODH）基因cDNA序列长度为1572bp，开放阅读框（ORF）为1536bp，编码511个氨基酸残基组成的蛋白质，其分子量为55.82KDa，理论等电点为9.19；天冬氨酸氧化酶（DDO）基因cDNA序列长为1044bp，ORF为1023bp，编码340个氨基酸残基组成的蛋白，其分子量为38.54Kda，理论等电点为8.57。6个野生群体拟穴青蟹PRODH和DDO基因表达量分析表明：PRODH在F x群体中表达量最高，且显著高于Zs、Gq和Zn群体（P＜0.05）；DDO在Zn和Fx群体中表达量最高，在Zs群体中表达量最少（P＜0.05）。RODH和DDO基因表达量与6个野生群体拟穴青蟹相应氨基酸含量线性回归分析表明：脯氨酸含量与PRODH相关性极低，天冬氨酸与DDO相关性较低，表明脯氨酸和天冬氨酸在不同群体拟穴青蟹中的含量可能受到其他因素的调控，而非简单的由单一的合成酶或分解酶控制，相关调控机制需进行深入研究。