FSTL3在结肠癌的临床意义、预后价值及作用机制的初步探索

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目的结肠癌发病率高且近年呈上升趋势。本文旨在探究编码基因卵泡抑素样蛋白3(Follistatin-like 3,FSTL3)及其表达在结肠癌的临床意义、预后价值及作用机制。方法利用来自TCGA-COAD数据库中肿瘤组织、癌旁组织、正常组织的FSTL3基因表达及临床病理特征的相关数据,分析FSTL3基因在不同组织的表达差异;FSTL3表达在各期结肠癌中的诊断价值;FSTL3表达与结肠癌患者临床病理特征的相关。分析FSTL3过表达可否作为独立危险因素影响结肠癌预后。富集分析FSTL3的生物学功能以及参与的信号通路。利用CRISPR/Cpf1编辑下调结肠癌细胞中编码基因FSTL3表达,构建稳定的FSTL3低表达细胞系,q PCR(实时荧光定量PCR)检验基因下调有效性。通过CCK-8、Transwell实验检验FSTL3表达下调后,结肠癌细胞系RKO、SW480的增殖、侵袭能力的变化情况。收集来自本院的31组结肠癌及癌旁病理组织,提取组织RNA,通过q PCR检验不同组织来源的FSTL3表达是否有明确差异;通过包埋、孵育、染色等免疫组化步骤,制备组织切片,显微镜下观察切片染色情况,对比FSTL3蛋白在结肠癌和癌旁组织中的分布情况;收集31名患者临床特征信息,分析FSTL3蛋白表达与临床病理特征的相关性。结果1.分析TCGA-COAD数据库中的FSTL3基因表达,发现肿瘤组织FSTL3基因表达较癌旁组织、正常组织均高;不同T分期、淋巴结转移、肿瘤位置、临床分期肿瘤组织之间的FSTL3基因表达有显著差异;FSTL3基因表达对Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ期结肠癌的诊断价值递增;FSTL3基因高表达与T分期、N分期、M分期、临床分期和患者的生存状况有关;FSTL3基因高表达与全部患者、T3/T4组、N0组、M0组、I/II期组、III/IV期组患者的总体生存率低相关;多变量Cox分析发现可视FSTL3基因高表达为影响结肠癌患者总体生存率的独立危险因素。2.富集分析显示FSTL3蛋白有负调控TGF-β/BMP信号通路、影响Smad蛋白信号转导、正调控Smad蛋白磷酸化、负调控细胞分化、影响血管生成、调节凋亡信号通路等作用。3.q PCR检测CRISPR/Cpf1编辑下调FSTL3的结肠癌细胞系(RKO、SW480),发现实验组结肠癌细胞中FSTL3基因表达较对照组显著下调。CCK-8、transwell实验显示FSTL3表达下调后结肠癌细胞的增殖、侵袭能力显著弱于对照组。4.q PCR检测31组病理组织显示结肠癌中FSTL3基因表达显著高于癌旁组织。免疫组化结果显示结肠癌组织细胞中的FSTL3蛋白表达较癌旁组织细胞中明显增高,分析FSTL3蛋白高表达与患者临床特征,示FSTL3蛋白高表达与肿瘤神经侵犯、中低分化显著相关。结论数据库分析显示FSTL3基因表达与结肠癌患者预后相关,细胞实验显示FSTL3表达与结肠癌细胞的增殖、侵袭相关,免疫组化分析显示结肠癌组织中的FSTL3蛋白表达显著高于癌旁组织。FSTL3有潜质成为结肠癌诊断、预后相关的生物标志物。
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