SAUR15在种子萌发中的功能及分子机理研究

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高等植物种子萌发是其生命周期中的一个关键阶段,播种后种子的快速整齐萌发是确保作物产量的基础。因此,深入研究种子萌发的生理、分子机制对农牧业生产具有重要的理论意义和应用价值。种子萌发是由细胞伸长驱动的复杂生物学过程,调控细胞伸长的油菜素内酯BRs及介导水分吸收和转运的水通道蛋白AQPs在种子萌发过程中发挥着关键作用。然而,BR介导种子萌发的分子机理尚不十分清楚,调控AQPs活性的上游蛋白还不明确。课题组前期研究发现,质膜定位的SAUR15-BRI1分子模块可独立于BIN2介导的经典BR信号途径,促进细胞伸长、调控拟南芥幼苗多个器官的生长发育。SAUR15-BRI1是否参与调控细胞伸长介导的种子萌发呢?具体作用机制又如何?为回答以上问题,本论文对SAUR15在种子萌发中的功能及作用机制进行了研究。取得以下主要结果:1.通过分析SAUR15相关植株的萌发速率及表型,发现SAUR15 T-DNA插入缺失突变体saur15-1的萌发速度低于野生型Col-0,而SAUR15超表达植株p SAUR15::SAUR15-FLAG与35S::SAUR15-FLAG的萌发速度高于Col-0。组织定位分析结果显示SAUR15在各萌发阶段种子中广谱表达。以上结果表明SAUR15在种子萌发过程中发挥正调控作用。2.以Col-0、saur15-1、SAUR15超表达植株p SAUR15::SAUR15-FLAG与35S::SAUR15-FLAG、BRI1弱突变体bri1-301和35S::SAUR15-FLAG in bri1-301为实验材料观察萌发表型,发现与Col-0相比,bri1-301萌发速度降低;通过分析BRI1的表达模式,发现BRI1在种子萌发吸胀后表达量上调,表明BRI1能够正调控种子萌发。另外,SAUR15超表达能够恢复bri1-301的萌发迟缓表型。以上数据结合之前的研究结果,表明SAUR15与BRI1相互作用,共同调控种子萌发。3.以Col-0、saur15-1、p SAUR15::SAUR15-FLAG与35S::SAUR15-FLAG、bri1-301株系的种子为材料,分析不同浓度BL与BRZ处理下各株系的萌发速率,发现BL处理促进各株系种子萌发,BRZ处理效果相反。与Col-0相比,BL处理对SAUR15超表达株系种子萌发的促进作用较强,对saur15-1及bri1-301的促进作用较弱;相反,BRZ处理对SAUR15超表达株系的抑制作用较弱,对saur15-1及bri1-301的抑制作用较强。以上结果表明SAUR15在BR调控的种子萌发过程中发挥正调控作用。4.通过Co-IP结合LC-MS/MS筛选SAUR15与BRI1的相互作用蛋白,确定水通道蛋白PIP1;2和TIP1;2为目标蛋白。亚细胞定位结果表明PIP1;2及TIP1;2均定位于质膜。通过Bi FC和mb SUS酵母双杂交实验证明SAUR15、BRI1与PIP1;2、TIP1;2在质膜上具有直接相互作用。5.为研究PIP1;2、TIP1;2在种子萌发过程中的功能,经筛选鉴定获得纯合pip1;2、tip1;2突变体株系。通过分析Col-0、pip1;2、tip1;2的萌发速率及表型,发现与Col-0相比,pip1;2和tip1;2的萌发速率均较低,证明PIP1;2、TIP1;2在种子萌发过程中发挥正调节功能。本论文初步证明了SAUR15-BRI1在BR调控的种子萌发过程中发挥正调节功能,并通过与水通道蛋白PIP1;2、TIP1;2相互作用促进种子萌发。研究结果有助于拓展对种子萌发过程的认知,为分子设计育种提供理论依据,对农牧业生产也具有一定的指导价值。
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