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黄芪多糖（Astragalus Polysaccharide,APS）具有免疫调节、抗氧化、抗炎、抗肿瘤、抗癌和改善胰岛素抵抗等多种生物学功能。棕色脂肪组织（BAT）的主要功能是促进机体能量消耗以及燃烧多余的脂肪,并通过非战栗产热调节体温。课题组前期发现,APS可促进3T3-L1前体脂肪细胞增殖和分化,激活AMPK促进葡萄糖摄取。此外,APS能够通过抑制miR-721激活3T3-L1细胞中的PPARγ-PI3K/AKT-GLUT4通路从而减轻TNF-α诱导的胰岛素抵抗。截止目前,APS对C3H10T 1/2细胞成脂分化的影响及机制尚不明确。本研究旨在探讨APS对C3H10T 1/2细胞增殖及棕色脂肪化的影响及作用机制。试验在培养基中分别添加浓度为0.2 mg/mL,0.4 mg/m L,0.6 mg/m L,0.8 mg/m L和1.0 mg/m L的APS,采用LDH（Lactate Dehydrogenase）法检测APS是否对C3H10T 1/2细胞有毒性;采用CCK8（Cell Counting Kit-8）法检测APS对C3H10T 1/2细胞增殖的作用;通过Ed U染色法检测APS对C3H10T 1/2细胞增殖的影响。诱导C3H10T 1/2细胞成脂分化,通过油红O染色法探究APS对脂肪细胞脂滴大小及脂滴累积的影响;通过UCP1免疫荧光染色观察不同浓度APS对C3H10T 1/2细胞成脂能力的影响;通过q RT-PCR和W estern blot检测脂肪细胞分化关键基因及蛋白的表达;2-NBDG（2-[N-（7-nitrobenz-2-oxa-1,3-diazol-4-yl）amino]-2-deoxy-D-glucose）法检测APS对葡萄糖摄取能力的影响。同时,研究APS对IRS/AKT/GLUT4及AMPK/ACC胰岛素信号通路的影响。将C3H10T 1/2细胞诱导分化,取1.5 d样品,进行miRNAs测序。研究结果如下:1、浓度为0.2 mg/mL,0.4 mg/m L,0.6 mg/mL,0.8 mg/m L和1.0 mg/m L的APS均对C3H10T 1/2细胞无毒性。0.2 mg/m L和0.4 mg/m L的APS显著抑制C3H10T 1/2细胞增殖（P＜0.01）,且细胞增殖数量显著少于对照组。同时,APS处理显著降低了细胞周期关键蛋白PCNA和CDK4丰度（P＜0.01）。2、油红O结果显示,0.2 mg/mL和0.4 mg/mL APS导致成熟脂滴的数量明显多于对照组;细胞免疫荧光显示APS处理后,UCP1表达量高于对照组。APS显著促进了棕脂分化相关基因（UCP1、PRDM16、PGC1α）和相关蛋白（UCP1、CEBPβ、PPARγ、PRDM16、PGC1α）表达（P＜0.05）。此外,Cidea、Elvol、Cox7a m RNA水平表达量升高（P＜0.05）。综上,APS可有效促进C3H10T 1/2细胞成脂分化。3、APS提高C3H10T 1/2细胞葡萄糖摄取能力（P＜0.01）,激活了IRS/AKT/GLUT4及AMPK/ACC胰岛素信号通路。4、测序结果揭示了40个差异显著的miRNAs,其中22个miRNAs显著下调,18个miRNAs显著上调,q RT-PCR验证结果发现,mmu-miR-1258-5p表达显著下调（P＜0.05）且其靶基因Cux1的表达显著上调（P＜0.05）。双荧光素酶报告试验证明,mmu-miR-1258-5p直接与Cux1 3’UTR靶向结合（P＜0.05）,mmu-miR-1258-5p mimics和inhibitor分别抑制和促进CUX1蛋白表达（P＜0.01）。5、C3H10T 1/2细胞成脂分化阶段CUX1蛋白表达量升高,并在第3 d达到峰值,在第4 d表达量下降,但仍显著高于分化0 d时表达量。油红O结果显示,Cux1过表达促进脂肪分化关键蛋白表达（P＜0.01）,成熟脂滴数量明显增加;Cux1敲除后抑制脂肪分化关键蛋白（UCP1、PRDM16、PPARγ）表达（P＜0.01）,且成熟脂滴数量减少。这些结果表明,CUX1促进C3H10T 1/2细胞成脂分化。6、敲除Cux1后,APS对C3H10T 1/2细胞成脂分化的促进作用显著降低（P＜0.01）。全文结论:APS抑制C3H10T 1/2细胞增殖,提高C3H10T 1/2细胞胰岛素敏感性并通过调控mmu-miR-1258-5p,促进Cux1表达,进而影响C3H10T 1/2细胞成脂分化。