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内皮细胞(endothelial ceil)的活化与血管的许多生理、病理过程相关,参与炎症反应、血管重构、血栓形成、血管增生等。肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)对内皮细胞有显著的激活作用,引起血管通透性升高,白细胞募集。
肌球蛋白轻链激酶是一种依赖于Ca2+/CaM的底物专一性磷酸化酶,专一地磷酸化肌球蛋白轻链,从而调节细胞骨架。最近有研究发现,MLCK参与了牛肺动脉内皮细胞中TNFα/NF-κB通路的调节,但其作用机制还不清楚。本文利用MLCK敲除的小鼠肺微血管内皮细胞(MLCIC-/-mouse pulmonary microvascular endothelial cell,MLCK-/-MPMEC)及人脐静脉内皮细胞研究TMLCK的作用,并提出了一条MLCK调节TNFα/NF-κB的新的可能机制。我们研究发现:
1. TNFα/NF-κB的活化被MLCK抑制剂抑制。Western Blot分析结果表明,ML-7抑制了TNFα诱导的IκBα降解。免疫荧光结果显示:ML-7抑制了NF-κB(p65)的转核,相应地,受NF-κB调控的黏附分子ICAM-1的表达降低,白细胞的黏附减少。
2.TNFα/NF-κB的活化在所必须的。小鼠肺部微血管内皮细胞(MLCK-/-MPMEC),进一步证实了MLCK对于内皮细胞中TNFα激活的NF-κB的调节作用。以TNFα刺激细胞,NF-κB(p65)的转核被抑制,小鼠白细胞的黏附作用也明显受到抑制。
3.抑制MLCK就能够抑制TNFR1向细胞质膜的转移。为了寻找MLCK作用于TNFα/NF-κB的调节靶点,我们研究了TNFα刺激后TNFR1在细胞内的分布,结果显示,TNFR1向细胞质膜的转移在ML-7处理的HUVEC和MLCK-/-MPMEC中均受到抑制。
结论:我们的研究证实了内皮细胞中MLCK在TNFα/NFκB中的作用,并提出:调节TNFR1从胞内向细胞质膜的转移可能是其作用的一个新的机制。