目的：体外培养原代人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,hUMSCs),并对其进行传代扩增,观察及鉴定其生物学特性,经尾静脉注射移植hUMSCs治疗缺血性脑卒中,探讨其作用机理并且提供理论依据及实验基础。方法：取足月妊娠健康新生儿脐带,PBS充分冲洗,剔除脐带血管及羊膜,将华通胶(Wharton’s jelly)剪碎至1mm3大小,将组织植入培养皿中,在含有10%胎牛血清(fetal bovine senun,FBS)、10ng/ml碱性成纤维生长因子的DMEM/F12中培养,观察细胞形态变化,细胞融合至80%-90%后原代细胞培养完成,进行消化传代。收集P5代细胞,流式细胞仪检测细胞表面表型,包括FITC-CD29、FITC-CD44、FITC-CD34、FITC-CD45、FITC-CD105、 CD106、FITC-HLA-DR等,并以FITC标记的二抗IgG作为同型对照。动物模型：选取左侧大脑中动脉栓塞再灌注模型(Middle Cerebral Artery Occlusion, MCAO),选取重量250-280g之间的雄性成年SD大鼠作为实验动物,待麻醉后取颈部正中切口,从颈总动脉结扎远端插入0.26mm尼龙线头约1.8cm,末端置于左侧大脑中动脉开口处,2小时后拔出尼龙线再灌注,同时设立对照组,对照组不插入尼龙线。术后24小时行改良神经功能评分(modified neurological severityscore, mNSS),并进行MRI检查及TTC染色,观察梗死的情况。选取mNSS评分在7-12分的大鼠随机分组：(1) hUMSCs移植组n=17,细胞移植量3×106；(2)磷酸盐缓冲液(Phosphate Buffered Saline,PBS)对照组,n=13。造模后24小时进行移植,经大鼠尾静脉注入CM-Dil标记的hUMSCs细胞悬液,术后1、7、14、21、28天对所有大鼠进行mNss评分,并将大鼠处死,行全脑连续冰冻切片,检测CM-Dil标记的移植细胞在缺血梗死脑组织中存活情况。采用SPSS统计学软件对实验数据进行统计分析。结果：组织块接种5天左右可见少量梭型成纤维样细胞爬出,7天可见小细胞集落形成,12至14天细胞可见大量生长,达到90%汇合程度,原代细胞培养完成。P1代细胞按1：1细胞传代,以后细胞可根据细胞数量1：2-1：3传代。传代后数十分钟后可见细胞迅速贴壁,2至3天可见细胞80-90%左右达到融合,并可见细胞呈旋涡状生长。流式细胞检测显示细胞强表达表达CD29、CD44、CD105,不表达CD34、CD46、CD106及HLA-DR。MCAO移植后神经功能评分证明PBS组大鼠在移植后1至14天主要在反应性、平衡感较MSC组差,神经功能评分有统计学差异(P<0.05),而14至28d神经功能评分未见明显差异(P>0.05)。实验组移植后7天行大鼠大脑冰冻切片,能在缺血区域找到红色荧光标记的移植细胞。结论：本实验证实了人间充质干细胞在脐带中含量丰富,且能在体外进行分离及大规模扩增培养,经尾静脉移植后能在大鼠脑内存活,并改善MCAO大鼠的神经功能。