马铃薯α-茄碱对灰葡萄孢菌的体外抑菌活性研究

来源 :内蒙古农业大学 | 被引量 : 3次 | 上传用户:tvxq905
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本试验用0.5%的硫酸浸提和28%的氨水沉淀的方法从马铃薯皮中提取糖苷生物碱(TGA),并采用柱层析和薄层层析的方法纯化分离出a-茄碱(α-solanine),以α-茄碱为试验材料,灰葡萄孢菌(Botrytis cinerea)为供试菌种,采用平板涂布法测定α-茄碱对灰葡萄孢菌的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MFC),菌丝生长速率法测定抑制率和半数效应浓度(ECs0)。并通过牛津杯法研究了α-茄碱体外抑制灰葡萄孢菌的影响因素(pH值、热处理、金属盐),在此基础上对a-茄碱的抑菌机制和机理进行初步研究。主要研究结果如下:(1)试验采用0.5%的硫酸浸提和28%的氨水沉淀的方法从马铃薯皮中提取糖苷生物碱,得粗样质量为1.38mg/g。通过薄层层析法(展开剂为氯仿-甲醇-2%氨水(70:30:5,v/v),显色剂为5%的硫酸乙醇液)鉴定,以硅胶为吸附剂,乙酸乙酯-95%乙醇-10%氨水(80:30:4,v/v)洗脱部位得到α-茄碱单体,α-茄碱的Rf值为0.38(与标准品一致)。洗脱液旋转蒸发得a-茄碱。(2)采用平板涂布法测定α-茄碱对灰葡萄孢菌的MIC是12.5μmol/L, MFC是18.75μmol/L。通过菌丝生长速率法测定α-茄碱对灰葡萄孢菌的抑制率及EC50值,得出:α-茄碱浓度为18.75时,其对灰葡萄孢菌的抑制率达到93.24%,α-茄碱的ECso值为7.241μmol/L。(3)采用牛津杯法测定不同浓度的α-茄碱对灰葡萄孢菌的体外抑制效果,结果表明:当α-茄碱的浓度为50μmol/L时,其对灰葡萄孢菌表现出高度敏感性,且随着α-茄碱浓度的增加,敏感度增加。故本试验选取50μmol/L为α-茄碱对灰葡萄孢菌的最适抑菌浓度。在最适浓度下研究α-茄碱的抑菌活性受到pH、热处理温度和时间、金属盐的影响。当α-茄碱溶液的pH值为7时,对灰葡萄孢菌的抑制效果最好;对α-茄碱进行热处理会影响其对灰葡萄孢菌的抑制效果,当加热温度不超过80℃时,其抑菌效果具有良好的稳定性,尤其当温度不超过60℃时,随着加热时间的延长,其抑菌圈直径变化小于1mm;当加热温度升至80℃,其抑菌圈直径随温度增加和时间延长而缩小;浓度为0.25%、0.5%、1%、2%和3%的NaCl、MgSO4、CaCl2和KC1均能加强α-茄碱对灰葡萄孢菌的抑制效果,且在此浓度范围内随金属盐浓度增大,α-茄碱的抑菌直径增大,效果增强。(4)由α-茄碱对灰葡萄孢菌作用后的转移实验得出结论:α-茄碱对灰葡萄孢菌的作用方式与它的浓度和作用时间有关,6.25μmol/L和12.5μmol/L的α-茄碱与灰葡萄孢菌接触3d,对其起仅抑制作用;6.25μmol/L和12.5μmol/L的α-茄碱与灰葡萄孢菌接触6d、12d和18.75μmol/L的α-茄碱与灰葡萄孢菌接触3d、6d、12d,对其均有杀灭作用。通过对不同浓度的α-茄碱对灰葡萄孢菌孢子抑制的速率和持续时间的测定得出结论:18.75μmol/L和25μmol/L的α-茄碱对灰葡萄孢菌孢子的杀灭时间分别为10h和8h。在含有不同浓度α-茄碱的PDB体培养基中生长的灰葡萄孢的细胞外渗率均有升高,且差异显著。
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