【摘 要】
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梅花（Prunus mume Sieb.et Zucc.）是蔷薇科（Rosaceae）李属（Prunus）落叶小乔木,具有独特的园林观赏价值和经济价值。在武汉,夏季的高温和干旱会导致梅花叶片卷曲,严重影响其正常生长。本研究以‘粉皮宫粉’与‘雪梅’的杂交F1种子的子叶为材料,在前人研究的基础上对梅花子叶再生体系进一步完善,并优化了农杆菌介导的梅花遗传转化体系,获得了转梅花小热激蛋白Pms HSP的植
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梅花（Prunus mume Sieb.et Zucc.）是蔷薇科（Rosaceae）李属（Prunus）落叶小乔木,具有独特的园林观赏价值和经济价值。在武汉,夏季的高温和干旱会导致梅花叶片卷曲,严重影响其正常生长。本研究以‘粉皮宫粉’与‘雪梅’的杂交F1种子的子叶为材料,在前人研究的基础上对梅花子叶再生体系进一步完善,并优化了农杆菌介导的梅花遗传转化体系,获得了转梅花小热激蛋白Pms HSP的植株,以期培育能在武汉高温和干旱条件下正常生长的梅花新种质。主要的研究结果如下:1、梅花子叶再生最佳激素浓度组合。成熟胚子叶在培养基QL+6-BA1.0mg/L+TDZ 0.8mg/L+IBA 0.05mg/L中暗培10d放入光下,其子叶的再生率达最高为25.00%。20d后不定芽生长较健壮,叶片较绿,在接下来的培养中叶片慢慢展开,能够正常生长成苗。2、不同光照条件下梅花子叶再生率的比较。经实验对比,成熟胚子叶暗培10d后转入光照条件下,再生率最高,达25.00%。在光照条件下梅花子叶再生率较低。3、梅花子叶再生苗增殖生长最佳基本培养基的筛选。子叶在基本培养基为QL培养基中生成成簇的不定芽,在后期的增殖过程中叶片则开始渐渐张开,生长健壮。4、梅花子叶再生苗伸长生长的最佳培养基的筛选。经过不同培养基的对比比照,成熟胚子叶的再生苗的伸长生长培养基为先在1/2MS+BA 0.5mg/L+KT0.5mg/L+NAA 0.05mg/L培养基过度一段时间,后转入QL+BA 1.0mg/L+IBA0.1mg/L中,最后再移入QL+BA 0.5mg/L+IBA 0.1mg/L培养基中伸长生长。5、梅花子叶的遗传转化体系优化。预培养3d,侵染15min,以Km 25mg/L及Cef 300mg/L为筛选压,共培养3d,延迟筛选时间未成熟胚子叶和成熟胚子叶分别为7d、10d时遗传转化效果最好。6、梅花转基因植株的PCR检测。通过优化的遗传转化体系,以梅花未成熟胚子叶为受体获得63株抗性苗,PCR检测11株呈阳性,后期下地成活3株PCR阳性植株。以梅花成熟胚子叶为受体共得到抗性苗20株,经PCR阳性检测呈阳性的为3株,成熟胚子叶转化苗目前无成活的下地植株。7、梅花抗性苗的增殖培养以及生根培养。在不添加抗生素Km的QL+BA0.5mg/L+IBA 0.1mg/L+Cef 300mg/L培养基中增殖生长状况良好。由于转基因植株较再生苗生根较困难,首先将其放在1/2MS+BA 3.0mg/L中,高浓度细胞分裂素刺激茎基部产生大量愈伤,再将产生了愈伤的抗性植株放入200mg/L IBA液体中浸泡15-20s,之后放于不含任何激素的1/2QL培养基中继续培养,15d左右即可生根长出新叶。
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