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目的:研究小建中汤能否通过缺氧诱导因子1-α(HIF-1α)/Bcl2/腺病毒E1B相互作用蛋白3(Bnip-3)信号通路阻止胃黏膜上皮细胞自噬,从而抑制胃癌前病变(GPL)的恶性表型,发挥治疗或逆转大鼠GPL的作用,以求完善与丰富小建中汤治疗GPL的内在分子机制,为临床运用小建中汤提供更为科学的依据。方法:以60只5-7周龄雄性Wistar大鼠为实验对象,适应性喂养1周,随机分为空白组(K)、模型组(M)、小建中汤低(XJZD)、中(XJZZ)、高(XJZG)剂量组、维甲酸组(WJS),除空白组外,其余大鼠均采用N-甲基-N-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)复合造模法建立GPL模型,即MNNG(180 mg·L-1)加15%乙醇溶液避光自由饮用+热盐水雷尼替丁(2.25 g·L-1,40℃)与20%乙醇交替灌胃(2.5ml/d),并结合饥饱失常法(饱食2d,禁食1d),连续造模30周。造模完成后,连续给药6周。末次给药后禁食24h,取材后制作病理切片,通过HE、AB-PAS染色分别观察大鼠胃黏膜组织病理学改变以及GPL进展情况;IHC检测大鼠胃黏膜组织自噬标志物p62表达情况;Western blot法检测大鼠胃组织HIF-1α、Bnip-3、Beclin-1、LC-3II蛋白表达;RT-PCR法检测大鼠胃组织中HIF-1α、Bnip-3、Beclin-1、LC-3II、CDX-2m RNA表达。结果:1.小建中汤对大鼠一般情况的影响空白组大鼠精神及营养状态良好、运动自如、皮毛旺盛、食纳正常、大便成形。与空白组比较,模型组大鼠精神状态萎靡、营养差、运动减少、食纳减少、大便溏稀。各治疗组、阳性药物组大鼠相较于模型组各项症状均有不同程度减轻,以小建中汤高剂量组改善最为明显。2.小建中汤对GPL大鼠病理学状态的影响与空白组比较,模型组大鼠胃黏膜腺体结构与排列紊乱,病理性核分裂及核仁突出,且细胞异型性明显,胃黏膜可见弥漫性分布的蓝染病灶,呈多灶性萎缩并伴有IM及Dys;相较于模型组,各治疗组与阳性药物组胃黏膜上皮腺体完整、规则,细胞异型性改善,蓝染面积缩小,IM病灶减少,以小建中汤高剂量组改善最为明显。3.小建中汤对GPL大鼠胃黏膜自噬标志物p62表达的影响空白组大鼠胃黏膜组织可见p62阳性表达,无明显缺失或低表达;相较于空白组,模型组大鼠胃黏膜组织p62表达(棕色)明显减少;小建中汤各剂量组及维甲酸组的p62表达(棕色)均有不同程度增加,其中以小建中汤高剂量组增加最为明显。4.小建中汤对GPL大鼠胃黏膜上皮细胞HIF-1α/Bnip-3信号通路的影响4.1小建中汤对GPL大鼠胃黏膜上皮细胞HIF-1α、Bnip-3、Beclin-1、LC-3II蛋白表达的影响模型组大鼠相较于空白组其胃黏膜组织HIF-1α、Bnip-3、Beclin-1、LC-3II蛋白的表达显著增加(P<0.01);与模型组比较,小建中汤高剂量组、维甲酸组HIF-1α蛋白表达显著降低(P<0.01),小建中汤中、高剂量组和维甲酸组胃黏膜组织Bnip-3、Beclin-1蛋白表达显著降低(P<0.01),小建中高剂量组、维甲酸组LC-3II蛋白表达显著降低(P<0.01,P<0.05)。4.2小建中汤对GPL大鼠胃黏膜上皮细胞HIF-1α、Bnip-3、Beclin-1、LC-3II、CDX-2m RNA表达的影响与空白组比较,模型组大鼠胃黏膜组织HIF-1α、Bnip-3m RNA相对表达显著升高(P<0.01);与模型组比较,小建中汤高剂量组和维甲酸组大鼠胃黏膜组织HIF-1α、Bnip-3m RNA相对表达显著降低(P<0.01)。与空白组比较,模型组大鼠胃黏膜组织中自噬相关m RNA Beclin-1、LC-3II以及与IM相关的CDX-2m RNA相对表达显著升高(P<0.01);而与模型组比较,小建中汤高剂量组和维甲酸组大鼠胃黏膜组织中Beclin-1、LC-3II、CDX-2m RNA相对表达则显著降低(P<0.01)。结论:1.小建中汤能显著改善MNNG诱导的GPL大鼠胃黏膜病理程度,降低IM相关m RNACDX-2表达水平,抑制GPL胃黏膜IM的进展。2.小建中汤能显著抑制GPL大鼠胃黏膜上皮细胞自噬,降低大鼠胃黏膜组织中与自噬相关Beclin-1、LC-3IIm RNA表达水平,并提高自噬流标志物p62表达。上述结果提示小建中汤可能通过防止胃黏膜上皮细胞的自噬抑制了大鼠胃黏膜GPL的进展。3.小建中汤能够抑制GPL大鼠胃黏膜上皮组织中HIF-1α、Bnip-3蛋白表达,并抑制其下游参与自噬过程的Beclin-1、LC-3II的蛋白与m RNA表达。4.综上,小建中汤能通过阻止HIF-1α/Bnip-3信号通路活化,防止GPL胃黏膜缺氧微环境下对线粒体自噬的诱导以及抑制了线粒体的自噬水平,抑制了IM、异型细胞增殖,进而阻止了GPL进展。