富硒光合细菌的筛选、驯化及其对D-半乳糖模型小鼠抗氧化系统影响的研究

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本文从不同产地的采集的水样中筛选、纯化出一株耐亚硒酸钠性能高的光合细菌菌株G3,对它进行了初步16SrDNA的菌种鉴定,耐硒驯化、培养条件和富硒条件的优化,初步探讨了施硒对其营养品质的影响,并研究了其对D-半乳糖衰老模型小鼠抗氧化系统的影响。 通过形态学特征的观察,16SrDNA同源性比较,了解序列保守性,确定G3为红假单胞菌属的沼泽红假单胞菌(Rhodopseudomonas palustris)。菌株的发酵条件优化试验表明:比较理想的富硒发酵培养基配方(R/L)为乳酸纳2g/L、乙酸钠2g/L、硫酸铵1g/L、蛋白胨0.2g/L、酵母膏0.4g/L、微量元素1ml、pH 7.0。 为了确定沼泽红假单胞菌转硒培养的最佳条件,首先对沼泽红假单胞菌进行了耐硒驯化,显著提高了G3对对亚硒酸钠的耐受性,菌体对亚硒酸钠耐受性的临界浓度由2×10<-5>mol/L上升到5×10<-5>mol/L。同时研究了无机硒的加入浓度、时间对菌体生长和转硒效率的影响。实验结果表明,转硒的最佳时间是在接种后12~18小时。实验还表明分批补料补硒培养可以提高菌体浓度和硒的转入量,最终可使硒转入绝对量增加39.25%。 通过对富硒沼泽红假单胞菌营养成分的分析,我们探讨了硒对沼泽红假单胞菌营养品质的影响。实验结果表明硒对沼泽红假单胞菌的生长和代谢有一定的影响,并能增加菌体蛋白质的含量和一些氨基酸的含量。同时维生素B<,2>的含量也有显著增加。富硒沼泽红假单胞菌菌体内SOD酶和CAT酶的活性也有显著增加。 用沼泽红假单胞菌和富硒沼泽红假单胞菌灌喂衰老模型小鼠(用D-半乳糖制备),60天后检测各组小鼠血液,血清,肝组织中超氧化物歧化酶(SOD)活性,谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性、丙二醛(MDA)含量、T-AOC能力。结果表明,富硒沼泽红假单胞菌可显著提高D-半乳糖衰老模型小鼠血液、血清、肝组织SOD活性、GPX-Px活性,使T-AOC能力明显增高,并使衰老小鼠体内MDA含量明显下降。 通过对D-半乳糖模型小鼠肝细胞超微结构的电镜观察,研究了富硒沼泽红假单胞菌对D-半乳糖模型小鼠肝结构和功能的保护作用,结果表明富硒沼泽红假单胞菌可有效减轻肝细胞超微结构受损伤程度。富硒菌体提高体内抗氧化能力和修复肝细胞超微结构受损伤程度的作用较一般菌体更为显著。
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