【摘 要】
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目的:以凋亡相关因子为切入点,研究醒脑灌肠液对心脏骤停心肺复苏（CA/CPR）后大鼠海马及皮质细胞中凋亡相关因子Bcl-2、Bax、Caspase-3表达趋势的影响,并探索凋亡上游PI3K、Akt、JNK通路蛋白表达情况,进而阐述醒脑灌肠液对CA/CPR大鼠脑保护作用的机制。方法:（1）健康SPF级SD雄性大鼠随机分为4组,分别为假手术组（Sham）、模型组（CPR）、醒脑灌肠液（XNGC）组、安
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目的:以凋亡相关因子为切入点,研究醒脑灌肠液对心脏骤停心肺复苏（CA/CPR）后大鼠海马及皮质细胞中凋亡相关因子Bcl-2、Bax、Caspase-3表达趋势的影响,并探索凋亡上游PI3K、Akt、JNK通路蛋白表达情况,进而阐述醒脑灌肠液对CA/CPR大鼠脑保护作用的机制。方法:（1）健康SPF级SD雄性大鼠随机分为4组,分别为假手术组（Sham）、模型组（CPR）、醒脑灌肠液（XNGC）组、安宫牛黄丸（AGNH）组,其中AGNH组为阳性对照,每组至少6只。（2）按照Utstein模式建立心肺复苏模型:对CPR组、XNGC组和AGNH组大鼠窒息法行心脏骤停（CA）后心肺复苏术（CPR）,当自主循环恢复（ROSC）时,在0h、24h、48h分别对XNGC组和AGNH组大鼠灌肠给药。各组进行神经功能缺陷评分后取脑组织。（3）苏木素-伊红染色法和TUNEL染色法观察脑海马和皮质区病理情况和凋亡率。（4）免疫组化和Western Blot法观察大鼠脑海马区和皮质区Bcl-2、Bax、Caspase-3的蛋白表达情况。（5）Western Blot法检测大鼠脑海马区和皮质区p-PI3K、p-Akt、p-JNK、JNK蛋白的表达趋势,并对48h时大鼠存活率进行统计作图。结果:（1）与Sham组相比,CPR组2h、24h、48h的神经功能缺陷评分显著升高（P＜0.01）,不论是海马区或者皮质区,凋亡率均增加（P＜0.01）且细胞排列紊乱,胞浆水肿明显,Bax、Caspase-3、p-PI3K、p-Akt、p-JNK/JNK蛋白表达明显增加（P＜0.01）,Bcl-2表达明显降低（P＜0.01）。（2）与CPR组相比,XNGC组和AGNH组2h时神经功能缺陷评分无差异（P＞0.05）;XNGC组24h神经功能评分与与CPR组比有明显差异（P＜0.01）,AGNH组24h神经功能评分与CPR组比有差异（P＜0.05）;与CPR组相比,XNGC组和AGNH组48h时神经功能缺陷评分有明显差异（P＜0.01）。与CPR组相比,XNGC组和AGNH组在海马区及皮质区,TUNEL阳性率均降低,细胞凋亡率均明显降低（P＜0.01）。（3）海马区结果显示,在免疫组化分析后,与CPR组相比,XNGC和AGNH组Bcl-2表达均增加（P＜0.05）,XNGC组Bax表达量较CPR组明显减少（P＜0.01）,AGNH组Bax表达量较CPR组减少（P＜0.05）,XNGC和AGNH组比CPR组Caspase-3表达明显减少（P＜0.01）;在Western Blot结果中,与CPR组相比,XNGC组和AGNH组Bcl-2表达均上调（P＜0.05）,XNGC组和AGNH组Bax表达量相较于CPR组均明显下调（P＜0.01）,XNGC组较之CPR组Caspase-3表达量明显下调（P＜0.01）,AGNH组较之CPR组Caspase-3表达量下调（P＜0.05）;皮质区结果显示,在免疫组化结果和Western Blot结果为:与CPR组相比,XNGC和AGNH组Bcl-2表达均明显增加（P＜0.01）,Bax、Caspase-3表达均明显减少（P＜0.01）。（4）海马区结果示,与CPR组相比,XNGC组和AGNH组p-PI3K、p-Akt、p-JNK/JNK表达明显降低（P＜0.01）;皮质区结果示,XNGC组和AGNH组pPI3K、p-Akt、p-JNK/JNK表达同样明显降低（P＜0.01）。（5）与CPR组相比,XNGC组和AGNH组大鼠存活率较CPR组高。结论:醒脑灌肠液可能通过下调凋亡因子Bax、Caspase-3和上调抗凋亡因子Bcl-2发挥对CA/CPR后缺血缺氧性脑病的脑保护作用,且上游可能通过影响p-PI3K、p-Akt、p-JNK/JNK相关蛋白进行凋亡通路的调节。
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