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目的:本实验研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A(Trichostatina A)和帕比司他(Panobinostat LBH589)对遗传性牙龈纤维瘤来源间充质干细胞(H-GMSC)的细胞周期、增殖凋亡是否有影响及其相关分子机制,为遗传性牙龈纤维瘤病的临床治疗提供新的手段。方法:1.遗传性牙龈纤维瘤来源间充干细胞(H-GMSC)的分离、培养及鉴定。第三代健康牙龈间充质干细胞(N-GMSC)由本课题组内提供。H-GMSC分离自遗传性牙龈纤维瘤病患者牙龈组织,选取生长状态良好遗传性牙龈纤维瘤来源间充质干细胞,流式检测H-GMSC表面的干细胞标记分子的表达情况。并对分离所得牙龈间充质干细胞进行成骨成脂分化诱导,分别通过茜素红染色、油红O染色鉴定间充质干细胞成骨成脂的多潜能分化能力。2.组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A(Trichostatina A TSA)和帕比司他(Panobinostat LBH589)对H-GMSC的细胞周期、增殖凋亡的调节及其分子机制通过MTT和Annexin V法检测不同浓度TSA和LBH589,即0 nM,50 nM,100 nM,200 nM,500 nM,1000 nM处理遗传性牙龈纤维瘤来源间充质干细胞后对增殖和凋亡的影响。采用流式细胞术检测不同浓度TSA和LBH589对H-GMSC细胞周期的作用。采用半定量RT-PCR检测N-GMSC和H-GMSC中p21 Waf/Cip1的表达情况。通过不同浓度TSA和LBH589处理N-GMSC/H-GMSC后,检测p21 Waf/Cip1的表达变化,并进行统计学的分析。结果:1.培养正常人牙龈间充质干细胞(N-GMSC)/遗传性牙龈纤维瘤来源间充干细胞(H-GMSC),显微镜下可观察到长梭形或多角形呈旋涡状排列,生长良好的间充质干细胞细胞。流式细胞术检测H-GMSC表面干细胞标记分子结果显示CD90、OCT-4、SSEA-4、CD146表达;H-GMSC体外成骨诱导分化可见钙化结节形成,茜素红染色呈阳性;成脂诱导分化后油红O染色为阳性。2.MTT法检测显示TSA和LBH589抑制H-GMSC增殖,且随浓度增长,增殖活性降低,即呈浓度依赖性。流式细胞术Annexin V法检测显示TSA和LBH589促进H-GMSC凋亡并具有浓度依赖性。不同浓度TSA和LBH589处理H-GMSC后,流式细胞实验结果显示TSA和LBH589均促进G1期,具有浓度依赖性。通过半定量RT-PCR发现,H-GMSC与N-GMSC相比,p21 Waf/Cip1表达降低。H-GMSC经过组蛋白去乙酰化酶抑制剂TSA或LBH589处理后,p21 Waf/Cip1表达上调,调节细胞周期,抑制细胞增殖。结论:1.遗传性牙龈纤维瘤患者牙龈组织分离获的牙龈间充质干细胞(H-GMSCs)。流式细胞术检测H-GMSC表面的干细胞标记分子结果显示CD90、OCT-4、SSEA-4、CD146表达;H-GMSCs经成骨成脂诱导分化,茜素红、油红O染色均呈阳性,具有多向分化能力。2.组蛋白去乙酰化酶抑制剂TSA和LBH589可以上调遗传性性牙龈纤维瘤细胞的p21 Waf/Cip1,延长G1期,抑制细胞增殖,促进细胞凋亡,并具有浓度依赖性。