【摘 要】
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白细胞介素2(Interleukin-2,IL-2)主要是由激活的T淋巴细胞产生的一类细胞因子,在机体免疫应答中起重要作用.其最重要的功能是诱导T淋巴细胞增殖(从G0期到S期)和分化,并且具
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白细胞介素2(Interleukin-2,IL-2)主要是由激活的T淋巴细胞产生的一类细胞因子,在机体免疫应答中起重要作用.其最重要的功能是诱导T淋巴细胞增殖(从G0期到S期)和分化,并且具有刺激T辅助细胞和自然杀伤细胞分泌细胞因子等功能.采用重组DNA技术生产牛白细胞介素2(Bovine Interleukin-2,BoIL2)作为免疫增强剂和免疫治疗剂无疑具有重要意义.该文成功实现了BoIL2在巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)中的表达.Pichia pastoris表达系统是近年来得到迅速发展的一种真核表达系统.Pichiapastoris是一种甲醇酵母,可以在以甲醇为唯一碳源和能源的培养基中生长.在表达真核细胞外源蛋白时,不仅具有原核生物生长快、操作简便、成本低的特点,又具备哺乳类动物细胞的翻译后加工和修饰的功能,从而表达有生物活性的蛋白.该研究将BoIL2基因成熟肽编码序列cDNA定向克隆到Pichia pastoris表达载体pPICZB中,构建出含BoIL2基因的重组质粒pPICZB-BoIL2,将经Sac Ⅰ酶切后线性化的pPICZB-BoIL2电转化到巴斯德毕赤酵母X-33中,经ZeocinTM抗性浓度梯度筛选出高拷贝重组菌株,用1﹪甲醇诱导目的蛋白表达.经SDS-PAGE及Western Blotting检测,表明BoIL2基因在酵母细胞质中获得了可溶性表达;通过金属螯合亲和层析(MCAC)获得纯化的C端带有His-Tag的重组蛋白;培养IL2依赖的小鼠CTLL-2细胞进行活性检测,证实所表达的重组BoIL2具有促淋巴细胞增殖的生物学活性.
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