【摘 要】
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目的:建立子宫内膜异位症小鼠模型,初步明确不同浓度的木犀草素对小鼠子宫内膜异位症模型异位病灶纤维化的干预作用,并进一步探讨其可能的作用机制。方法:1.选择健康雌性未孕C57BL/6小鼠作为研究对象,采用腹壁手术固定内膜组织的方法建立子宫内膜异位症模型,分别于造模后第5、7、14、21天随机处死一组小鼠,分离异位病灶。进行异位病灶的观察,行HE染色和Masson染色、Sirius Red染色判断异位
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目的:建立子宫内膜异位症小鼠模型,初步明确不同浓度的木犀草素对小鼠子宫内膜异位症模型异位病灶纤维化的干预作用,并进一步探讨其可能的作用机制。方法:1.选择健康雌性未孕C57BL/6小鼠作为研究对象,采用腹壁手术固定内膜组织的方法建立子宫内膜异位症模型,分别于造模后第5、7、14、21天随机处死一组小鼠,分离异位病灶。进行异位病灶的观察,行HE染色和Masson染色、Sirius Red染色判断异位病灶的病理组织形态和纤维化进展,为应用小鼠子宫内膜异位症模型进行药物治疗提供理论依据。2.将造模成功的小鼠随机分为模型组、孕三烯酮组、木犀草素低剂量组、木犀草素中剂量组和木犀草素高剂量组5个组。药物干预4周后第一天提取小鼠异位病灶组织,肉眼观察小鼠异位病灶生长情况,测量异位病灶体积。行HE染色和Masson染色、Sirius Red染色判断异位病灶的病理组织形态和纤维化进展;应用免疫组织化学法检测各组小鼠异位病灶中a-SMA、Col-1、CTGF、FN、TGF-β1、Smad2+3和Smad7的蛋白因子表达情况;q PCR检测各组小鼠异位病灶中a-SMA、Col-1、CTGF、FN、TGF-β1、Smad2+3和Smad7的m RNA表达情况;Western blot检测各组小鼠异位病灶中TGF-β1、p Smad2+3、Smad2+3和Smad7的蛋白表达情况,探讨木犀草素的作用机理。结果:1.采用手术固定移植腹壁的方法建立小鼠子宫内膜异位症模型,操作简单且成模率高,是一种稳定可靠的建模方法;模型建立第21天,异位病灶趋于稳定状态,出现大量纤维染色,为治疗性用药最佳干预点。2.药物干预4周后,与模型组比较,治疗组显著抑制了异位病灶的生长,改善盆腔粘连状况。HE染色镜下观察木犀草素能使内膜腺体及间质细胞数目减少,细胞核减小,腺腔萎缩,从而达到抑制子宫内膜增长的效果。3.与模型组相比较,木犀草素中、高剂量和西药孕三烯酮组异位病灶纤维染色面积比率明显降低,而木犀草素低剂量组相对较低,差异有统计学意义;同时与模型组比较,木犀草素治疗组异位病灶组织行免疫组化以及RT-PCR结果显示纤维化表达产物a-SMA、Col-1、CTGF、FN表达降低,这说明木犀草素在缓解EMS纤维化的病理过程中具有一定的作用。4.进一步的机制研究中,我们发现木犀草素干预组的EMS小鼠模型异位病灶组织中TGF-β1、Smad2、Smad3蛋白以及m RNA表达较模型组降低,而Smad7表达则上升。结论:1.成功建立小鼠子宫内膜异位症模型,操作简单且成模率高,是一种稳定可靠的建模方法,且可以进行后续试验。2.木犀草素可以抑制异位病灶纤维化的进展且作用机制与抑制TGF-β1/Smads信号通路相关。
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