【摘 要】
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目的:1.筛选干细胞微成球能力较强的大肠癌细胞株。2.观察HIF-1α敲低后对大肠癌干细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响。3.观察抑癌方对大肠癌干细胞HIF-1α以及增殖和侵袭迁移能力的影响。方法:1.选用HT29和HCT116大肠癌细胞,采用无血清培养法培养两种细胞,构建相应的大肠癌干细胞微成球模型,在相应天数观察两种细胞微成球能力的差异。2.通过PCR和Western blot技术对大肠癌干细胞标
【基金项目】
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国家然科学基金面上项目:抑癌方对ROS/HIF途径调控血管拟态促进大肠癌侵袭转移的干预（项目编号:81473624）；
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目的:1.筛选干细胞微成球能力较强的大肠癌细胞株。2.观察HIF-1α敲低后对大肠癌干细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响。3.观察抑癌方对大肠癌干细胞HIF-1α以及增殖和侵袭迁移能力的影响。方法:1.选用HT29和HCT116大肠癌细胞,采用无血清培养法培养两种细胞,构建相应的大肠癌干细胞微成球模型,在相应天数观察两种细胞微成球能力的差异。2.通过PCR和Western blot技术对大肠癌干细胞标记物CD133、Lgr5进行鉴定,同时研究普通细胞和干细胞中HIF-1α的表达差异。3.采用慢病毒感染的方法构建大肠癌细胞HIF-1α低表达稳转株,以HIF-1α空载慢病毒作为对照组,观察HIF-1α低表达对大肠癌干细胞微成球能力的影响。4.采用HIF-1α空载慢病毒作为对照组,通过CCK8方法检测HIF-1α敲低后对大肠癌干细胞增殖能力的影响;通过Transwell方法检测HIF-1α敲低后对大肠癌干细胞侵袭和迁移能力的影响;通过PCR和WB技术研究HIF-1α敲低前后CD133、Lgr5、PCNA、KI67的表达情况;裸鼠尾静脉注射检测其侵袭转移瘤的形成能力。5.通过CCK8法检测抑癌方对大肠癌干细胞作用的最适浓度,观察该浓度下对大肠癌干细胞微成球能力,增殖能力以及侵袭迁移能力的影响,同时检测CD133、Lgr5、PCNA、KI67、HIF-1α的表达情况,裸鼠尾静脉注射观察抑癌方对侵袭转移瘤形成能力的影响。结果:1.HCT116大肠癌细胞系具有更强的干细胞微成球能力,HIF-1α在大肠癌干细胞中表达升高。2.HIF-1α低表达抑制HCT116大肠癌干细胞的微成球数目和大小,抑制了HCT116干细胞的增殖和侵袭迁移能力,同时CD133、Lgr5、PCNA、KI67的表达降低,裸鼠尾静脉注射干细胞侵袭转移瘤数目和大小降低。3.抑癌方能抑制HCT116大肠癌干细胞的微成球数目和大小,抑制了HCT116干细胞的增殖和侵袭迁移能力,同时HIF-1α、CD133、Lgr5、PCNA、KI67的表达降低,裸鼠尾静脉注射干细胞侵袭转移瘤数目和大小降低。结论:HIF-1α的低表达能抑制大肠癌HCT116干细胞的干性,即抑制大肠癌干细胞的微成球能力,以及增殖和侵袭迁移能力,同时抑癌方也能够抑制大肠癌HCT116干细胞的干性,并且能够抑制HIF-1α的表达。
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