【摘 要】
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目的:探索脑和肌肉芳香烃受体核转运样蛋白1（brain and muscle arnt-like 1,BMAL1）能否通过HIF-1α/VEGF通路调控放疗后结直肠癌MC38细胞的增殖能力。方法:通过检索公共数据库The Human Protein Atlas,发现BMAL1、缺氧诱导因子-1α（hypoxia inducible factor 1α,HIF-1α）和血管内皮生长因子（vascul
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目的:探索脑和肌肉芳香烃受体核转运样蛋白1（brain and muscle arnt-like 1,BMAL1）能否通过HIF-1α/VEGF通路调控放疗后结直肠癌MC38细胞的增殖能力。方法:通过检索公共数据库The Human Protein Atlas,发现BMAL1、缺氧诱导因子-1α（hypoxia inducible factor 1α,HIF-1α）和血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）在正常结肠组织和结肠癌组织存在蛋白表达差异。体外培养结直肠癌细胞,运用RNA干扰技术转染BMAL1 si RNA,构建BMAL1基因敲除的结直肠癌细胞株。将体外培养的MC38细胞分为对照组、BMAL1基因敲除组、放疗组、BMAL1基因敲除联合放疗组。CCK-8法检测各组结直肠癌细胞的增殖能力。q RTPCR实验检测各组细胞BMAL1、HIF-1α以及VEGF的m RNA相对表达水平。Western Blot实验检测各组细胞BMAL1、HIF-1α和VEGF蛋白的表达水平。结果:公共数据库结果显示,BMAL1、HIF-1α和VEGF的蛋白表达在结肠癌组织中比正常组织中高。经过RNA转染技术后,在RNA和蛋白水平验证成功构建了BMAL1基因敲除的细胞株。CCK-8实验结果显示,细胞增殖能力由强到弱依次为:对照组、BMAL1基因敲除组、放疗组、基因敲除联合放疗组,差异有统计学意义（P＜0.05）。q RT-PCR实验结果显示,联合组细胞HIF-1α和VEGF m RNA的表达量在四组细胞中均为最低,分别为对照组的0.40倍和0.38倍,其次为放疗组、基因敲除组,对照组HIF-1α和VEGF m RNA表达含量最多,差异有统计学意义（P＜0.05）。Western Blot实验结果显示,HIF-1α和VEGF蛋白在联合组细胞中表达水平最低,分别为对照组的0.45倍和0.35倍,其次为放疗组、基因敲除组,对照组HIF-1α和VEGF蛋白的表达水平最多,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论:敲除生物钟基因BMAL1可以抑制放疗后结直肠癌细胞的增殖能力,其机制可能与调控HIF-1α/VEGF信号通路有关。
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