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目的：利用手术创伤的方法在兔耳腹侧建立增生性瘢痕动物模型，局部应用三苯氧胺软膏对其进行实验性治疗。观察三苯氧胺对兔耳增生性瘢痕中成纤维细胞、胶原纤维、血管内皮细胞生长因子及羟脯氨酸含量的影响，探讨三苯氧胺软膏抑制瘢痕增生的作用，评价其抗瘢痕增生的临床潜能。
方法：
1实验动物：健康成年新西兰白兔24只，雌雄不拘，雌兔未孕，称重，编号。
2实验动物分组：将新西兰白兔随机分为3组：对照组、实验组A(1％TAM)及实验组B(2％TAM)，每组8只。
3麻醉：用10％水合氯醛溶液做腹腔注射麻醉，麻醉成功后固定于操作台上。
4建立兔耳增生性瘢痕模型：碘附消毒兔耳腹侧，在每只兔耳腹面避开血管做4个1.0cm×1.0cm大小方形的全层皮肤缺损创面，深至软骨表面。创面之间相距1cm，共做创面192个。术毕无菌纱布包扎创面，每日以碘附擦拭消毒直至创面愈合，共形成增生性瘢痕142处。
5药物实验：3组动物每组选40个增生性瘢痕于术后第15天开始外涂药物。
6标本制作：瘢痕涂药30天、60天时各组分别随机取15个瘢痕块，用无菌保险刀片自瘢痕的最高点垂直于耳软骨方向切开，将每个标本均分为两块，固定于4％多聚甲醛中，常规石蜡包埋切片，分别行常规HE染色、VG染色及免疫组化。瘢痕涂药60天后对照组和实验组B分别随机取3个瘢痕块，沿瘢痕凸起最高点取0.3cm×0.3cm的组织，做透射电镜。
7观测指标：(1)大体观察。(2)测量瘢痕增生指数。(3)成纤维细胞数密度NA(Numericaldensityonarea)：400倍光镜下观察HE染色切片，每个标本随机选5个视野(0.0052mm2/视野)，目测计数并计算切片内单位面积成纤维细胞数量，结果取均数。(4)胶原纤维面密度AA(Areadensityonarea)：200倍光镜下观察标本VG染色切片，随机选取5个视野，利用计算机辅助病理图象分析系统计算红染的胶原纤维的面密度，结果取均数。(5)对免疫组化染色切片，光镜观察VEGF分布，200倍光镜下随机选取5个矩形视野以光密度200为背底，用计算机辅助病理图象分析系统测量平均光密度和积分光密度值并进行统计学处理。(6)根据试剂盒说明测量瘢痕组织内羟脯氨酸含量(HPr)。(7)透射电镜下观察对照组与实验组B间成纤维细胞的超微结构变化。
结果：
1大体观察：本实验兔耳增生性瘢痕动物模型共形成增生性瘢痕142个，瘢痕的发生率为74％。用药30、60天后，对照组瘢痕组织呈山丘样隆起，高出正常皮肤，颜色为紫红色，质地硬韧，但皮损边缘并不超过原手术损伤的范围。实验组A瘢痕组织呈平台样隆起，高出正常皮肤，颜色呈深红色，质地较软，个别瘢痕块体积减小不明显。实验组B稍隆起于正常皮肤，体积明显减小，多呈粉红色，质地较柔软。
2瘢痕增生指数：各组瘢痕均厚于正常皮肤，瘢痕增生指数：用药30天：对照组3.57±0.77；实验组A3.01±0.44；实验组B2.94±0.55。用药60天：对照组3.32±0.65；实验组A2.73±0.21；实验组B2.21±0.33。30天，60天时3组间差异均有显著性(P＜0.05)，随着药物浓度的增加，瘢痕增生指数下降。
3胶原纤维面密度：对照组胶原纤维染色增强，粗大，排列紊乱，并可见呈漩涡状排列，纤维走行互不平行、杂乱无章。实验组A胶原纤维结构较紧密，组织排列较规整，局部交错排列。基本平行于表皮排列，但有部分纤维排列紊乱。实验组B胶原染色少，纤维纤细，组织排列疏松，分布不均，着色深浅不一，大多与表皮平行排列。对照组胶原纤维面密度高于实验组(P＜0.05)，实验组A高于实验组B(P＜0.05)。
4成纤维细胞数密度NA：成纤维细胞数密度：用药30天，对照组4555.6±327.8，实验组A3447.8±296.6，实验组B2840.6±288.3：用药60天，对照组4758.2±305.6，实验组A3341.7±3110.8，实验组B2632.3±266.7。30天，60天时实验组与对照组间差异有显著性(P＜0.05)，NA随药物浓度的增加而减少。对照组有大量着色较深的成纤维细胞及细胞基质，成纤维细胞胞体较大，较多毛细血管生成，血管内皮细胞肥大，细胞总量比实验组A及B组多(P＜0.05)。实验组A有较多着色较深的成纤维细胞及细胞基质，毛细血管较前减少，成熟的成纤维细胞较多，排列比较整齐。实验组B，成熟的成纤维细胞占多数，细胞数量较A组明显减少(P＜0.05)排列成束状，毛细血管较少。
5透射电镜观察：对照组：成纤维细胞呈长梭形，体积较大，核呈长椭圆形，位于细胞中央，染色质丰富，异染色质较少，可见明显的核仁。细胞质丰富，充满同心圆排列、高度扩张的粗面内质网、线粒体。粗面内质网囊内可见分泌的蛋白粒子，其周围有大量胶原纤维。实验组B：成纤维细胞周围有少量的胶原纤维，核呈椭圆形，部分核膜融合消失。细胞质内粗面内质网部分扩张呈池状，线粒体变性，部分嵴与膜融合。
6免疫组化VEGF染色结果图象分析：30天，60天时对照组、实验组A、实验组B的VEGF阳性信号灰度均有差异，随着药物浓度的增加，逐渐减少，VEGF阳性信号灰度降低差异有显著性(P＜0.05)。
7HPr含量：用药30天：对照组10.9±0.54；实验组A9.34±0.32；实验组B7.63±0.26。用药60天：对照组9.93±0.42；实验组A8.74±0.27；实验组B7.03±0.15。30天，60天时实验组与对照组间均有差异，随着药物浓度的增加，HPr含量降低差异有显著性(P＜0.05)。
结论：应用三苯氧胺软膏对兔耳增生性瘢痕进行治疗可抑制成纤维细胞的增殖，明显减少胶原纤维生成，有效抑制瘢痕增生。三苯氧胺局部用药可减少瘢痕内VEGF含量，抑制毛细血管增生。本实验结果可为临床应用三苯氧胺软膏防治增生性瘢痕提供实验依据。