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目的:MicroRNA(miRNA)可以通过与特定基因mRNA的3’非翻译区结合,从而促使转录产物稳定性下降或抑制其翻译,进而影响多种生物途径,其中包括发育、分化、增殖和凋亡等。miRNA在肿瘤中的表达异常,对肿瘤的发生发展发挥着重要的作用。然而,miRNA的表达表现出组织特异性,并且受到转录后调控。已有报道发现miRNA可以调控其他miRNA,但其具体机制尚不清楚。本课题着重研究miRNA调控其他miRNA的机制和miR-103a-2-5p促进肝癌发生发展的机制。方法:首先,我们通过生物信息学方法,筛选可以靶定miR-34a的候选miRNA,并利用qRT-PCR和荧光报告载体实验技术进行验证,结果表明miR-103a-2-5p可以靶定miR-34a前体并抑制其成熟。其次,根据pri-miR-34a的loop结构特点,设计了其几种突变型,其中包括pri-miR-34a-M1,pri-miR-34a-M2,pri-miR-34a-M3。通过荧光报告载体实验和RNA dot blot实验,确定miR-103a-2-5p与pri-miR-34a loop结构直接结合的位点及其“种子”序列的作用。并通过qRT-PCR确定在多种细胞系中miR-103a-2-5p与miR-34a相互作用的普遍性。再次,为了解miR-103a-2-5p对肝癌细胞发生发展的影响,我们在肝癌细胞系 QGY-7703 及 HepG2 中,过表达 miR-103a-2-5p 与 miR-34a,进行 MTT、集落形成、qRT-PCR和Western Blot实验,并通过过表达pri-miR-34a的突变型,进一步验证miR-103a-2-5p是否通过靶定pri-miR-34a影响其成熟,提高miR-34a靶基因SIRT1的表达,从而发挥促进肿瘤细胞活性和增殖的能力。最后,裸鼠异体成瘤实验证明miR-103a-2-5p可以促进体内肿瘤形成。结果:我们通过生物信息学方法,筛选出包括miR-103a-2-5p在内的4种候选结合pri-miR-34a的loop结构的miRNA。在HEK-293T和QGY-7703细胞中,过表达miR-103a-2-5p可以抑制miR-34a的生成。荧光报告实验和RNA dot blot实验证明miR-103a-2-5p可以靶定pri-miR-34a的loop结构,其种子序列发挥了重要作用,从而证实miR-103a-2-5p可以直接靶定pri-miR-34a抑制其成熟。并在多种细胞系中证明miR-103a-2-5p与miR-34a的负相关性。进一步研究细胞中miR-103a-2-5p的作用,我们发现在QGY-7703和HepG2细胞中,过表达miR-103a-2-5p可以增强细胞活性和增殖能力。同时,MTT和集落形成实验进一步验证了miR-103a-2-5p可以通过靶定pri-miR-34a的loop结构抑制其表达从而促进肝癌细胞的活性和增值能力。qRT-PCR和Western Blot实验表明miR-103a-2-5p可以抑制miR-34a的生成,从而增加miR-34a靶基因SIRT1的表达。最后,我们发现miR-103a-2-5p可以促进体内肿瘤的形成。结论:我们首先发现miR-103a-2-5p可以通过直接靶定miR-34a从而抑制其成熟,miR-34a的loop结构以及miR-103a-2-5p的“种子”序列对其相互作用具有重要意义。同时,在肝癌细胞中,miR-103a-2-5p可以通过抑制miR-34a的成熟,从而促进SIRT1的表达,最终促进肿瘤的形成。