肝癌是一种发生在肝脏上的恶性肿瘤,目前主要的治疗方式是手术切除,但是预后较差易发生转移和复发。本研究以Hep3B肝癌细胞作为研究对象,希望从Hep3B肝癌细胞整体水平研究翻译后修饰对其蛋白及功能的影响。蛋白质翻译后修饰（PTM）主要形式包括泛素化、SUMO化、磷酸化等,泛素化的经典途径是介导蛋白质经26S蛋白酶体降解,SUMO化修饰可以调节蛋白的稳定性、亚细胞定位等。SUMO化修饰与泛素化修饰过程相似,但是SUMO化修饰不直接导致蛋白质的降解。UBC9是SUMO化修饰的唯一E2连接酶,课题组前期将UBC9诱导敲弱后的Hep3B细胞进行了iTRAQ定量质谱和泛素化质谱,我们经过分析两个质谱数据发现LaminA是两个质谱唯一共有蛋白。当UBC9敲弱后,LaminA表达下降,泛素化水平上升。因此,依据质谱数据本课题提出假设:Hep3B细胞UBC9敲弱后导致LaminA泛素化上升,从而引起LaminA表达下降。首先进行iTRAQ定量质谱数据的验证,结果显示降低UBC9的表达能下调LaminA蛋白表达,但不影响其m RNA表达。因此SUMO信号通路可能在蛋白水平层面调控LaminA的表达。进一步共转LaminA与SUMOs,发现SUMO1-3均能提高LaminA的表达。同时,将LaminA与SENPs共转,发现SENP7可以降低LaminA的表达。以上结果说明SUMO信号通路可以上调LaminA表达。泛素化质谱结果显示LaminA的第144位氨基酸是潜在泛素化位点。构建K144R点突变载体及免疫共沉淀实验发现K144R的泛素化下降明显,证实LaminA的K144是其泛素化位点。已有研究表明LaminA的第201、420、486位氨基酸是SUMO化修饰位点,本研究分别构建K201R、K420R、K486R点突变载体,发现除K201R外,K420R、K486R都可以明显降低LaminA表达。当三个位点同时突变,LaminA泛素化上升。以上实验证明了SUMO化修饰可以保护LaminA,抑制泛素化修饰引导LaminA的降解。LaminA是构成核纤层的主要成分,核纤层具有维持细胞核的形态、刚度和弹性的作用。细胞功能结果显示在Hep3B细胞过表达LaminA可以抑制细胞的增殖,侵袭,迁移能力,但是对细胞的克隆形成能力没有影响。说明LaminA的表达可以影响Hep3B细胞的功能。本研究通过探讨Hep3B肝癌细胞的SUMO化修饰和泛素化修饰对LaminA表达的影响以及LaminA对细胞功能的影响。发现Hep3B肝癌细胞中LaminA的SUMO化修饰可以明显地抑制泛素化修饰,从而可以稳定LaminA的表达。对深入研究肝癌中翻译后修饰的相互作用以及翻译后修饰对肝癌细胞蛋白和功能的影响具有一定的意义,同时也为探寻新的肝癌治疗方式提供思路和策略。