乳腺癌是女性发病率最高的恶性肿瘤。紫杉醇（Paclitaxel,PTX）是乳腺癌的一线化疗药物之一,可通过促进微管聚合并阻止其解聚而发挥抗肿瘤作用,但研究发现PTX可通过调控ATF3的表达引起乳腺癌的转移,影响PTX对乳腺癌治疗的有效性。ATF3作为转录激活因子参与乳腺癌的发生发展过程,但其在乳腺癌中的作用机制尚未完全阐明。通关藤注射液（Tong-Guan-Teng Injection,TGT）是临床常用的抗肝癌、肺癌等的辅助中成药,并可配合放化疗的辅助治疗。但TGT是否可增强PTX抗乳腺癌的增殖和转移作用,且作用机制是否与ATF3有关仍有待阐明。目的:研究ATF3介导的TGT增强PTX抗乳腺癌的作用,阐明TGT通过调控ATF3的表达增强PTX抗乳腺癌机制,为乳腺癌新的治疗靶点及中西医联合治疗方案提供给理论依据。方法:体外培养人乳腺癌MDA-MB-231细胞。TGT与PTX单用或联合作用于乳腺癌MDA-MB-231细胞,采用q RT-PCR和Western blot法检测ATF3 m RNA和蛋白的表达水平。Si RNA干扰ATF3的表达后,采用TGT和PTX单独或联合干预,q RT-PCR和Western blot检测ATF3及相关细胞因子的表达,划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力,Hoechst活细胞染色和流式细胞术检测细胞凋亡。采用MDA-MB-231细胞尾静脉注射的方法构建乳腺癌裸鼠肺转移模型,评价TGT和PTX两药联用对体内肿瘤转移的作用,免疫组化和Western blot法检测ATF3蛋白表达,HE染色观察转移组织中的细胞病理情况,ELISA检测血清中相关因子的表达。体外构建巨噬细胞和乳腺癌细胞共培养体系,干扰ATF3的表达,研究ATF3介导TGT联合PTX对巨噬细胞迁移和极化表型的影响,阐明TGT通过调控ATF3增强PTX抑制乳腺癌增殖和转移的机制。结果:1.通关藤注射液联合紫杉醇可影响ATF3的表达qRT-PCR和Western blot实验结果显示,PTX单用组可诱导ATF3 m RNA的高表达,而TGT联合PTX可降低ATF3 m RNA的表达;同样,与PTX单用组相比,TGT联合PTX组ATF3蛋白表达显著下调。流式细胞仪检测结果显示,TGT联合PTX与单药组相比,可显著抑制MDA-MB-231细胞凋亡;划痕和Transwell实验显示,TGT联合PTX与单药组相比,可显著抑制乳腺癌细胞的迁移和侵袭。结果表明,通关藤注射液增强紫杉醇抗乳腺癌作用可能与ATF3有关。2.通关藤注射液通过调控ATF3的表达增强紫杉醇体外抗乳腺癌的作用在ATF3-Si RNA干扰的MDA-MB-231细胞中,PTX可显著上调ATF3蛋白的表达,而TGT可以抵消PTX引起的ATF3蛋白表达的上调;TGT可显著抑制MDA-MB-231细胞的增殖和转移、诱导细胞凋亡,且TGT联合PTX组较PTX单药组作用更为显著。3.通关藤注射液增强紫杉醇在裸鼠体内的抗乳腺癌作用在尾静脉注射MDA-MB-231细胞的裸鼠乳腺癌肺转移模型中,与PTX单用或TGT单用相比,TGT与PTX联用对MDA-MB-231细胞尾静脉注射的肿瘤转移有更显著的抑制效果,且TGT高剂量组与PTX联用效果最佳。对肺组织病理形态观察的HE染色结果显示,TGT高剂量组与PTX联用后,大量肿瘤细胞坏死、细胞核皱缩且细胞形态发生改变;免疫组织化学检测结果显示,TGT联合PTX组ATF3的表达降低,且高剂量联合组效果更加显著;ELISA检测结果显示,裸鼠血清中细胞因子IL-1β和IL-6的表达显著降低。4.通关藤注射液通过ATF3影响巨噬细胞的极化作用结果显示,TGT可显著增强PTX对巨噬细胞的极化作用,提高了M1表型标志物CD86的表达,同时降低了M2表型标记物CD206的表达。与PTX单用组相比,TGT与PTX联用组乳腺癌细胞划痕愈合能力减弱;与乳腺癌细胞单培养组相比,共培养组细胞划痕愈合能力减弱;与共培养+PTX单用组比较,共培养+PTX+TGT组细胞在竖直方向迁移水平下降;Si ATF3干扰ATF3的表达后,与乳腺癌细胞单培养组相比,共培养+Si ATF3组细胞迁移水平显著下降。综上,TGT可通过ATF3促进巨噬细胞向M1型极化,增强PTX抗乳腺癌迁移的作用。结论:通关藤注射液通过调控ATF3的表达,增强紫杉醇的抗乳腺癌增殖和转移的作用,且作用机制可能与影响巨噬细胞极化有关。该研究将为中药与化疗药物联合治疗乳腺癌提供新靶点,同时也为乳腺癌的中西医结合治疗方案提供理论依据。