以线虫筛选抑制鳗弧菌的益生菌与其机制初探及新菌鉴定

来源 :山东大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:idcwang
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
随着海水养殖产业的发展和集约化养殖规模的不断扩大,水产养殖病害呈多发趋势。鳗弧菌(Vibrio anguillarum)所引起的鳗弧菌病因其流行性广、爆发性强成为其中最严重的疾病之一。近年来,控制鳗弧菌病的抗生素滥用不仅扰乱了水生生物肠道的正常菌群而且水产生物体内的药物残留将威胁到人类的健康和安全。益生菌制剂因其安全无毒已作为抗生素潜在替代品广泛地应用于生产中。由于益生菌分离来源的不同,往往导致益生菌制剂缺乏针对性和有效性。本文尝试从健康的牡蛎和鲈鱼肠道中分离筛选土著微生物,旨在分离的潜在益生菌能够更好的适应水生动物肠道环境,使其发挥有效的促进作用。但是如何从大量肠道微生物中快速高效地筛选针对性强且益生功能显著的菌株是目前益生菌研究面临的难题。本文结合体外和体内实验从牡蛎和鲈鱼肠道中筛选抑制鳗弧菌的海洋益生菌并对其作用机制进行了初步探究,最后对五株海洋新菌进行多相分类鉴定,丰富了海洋微生物资源。本论文取得的研究结果如下:(1)结合体外和体内实验筛选到一株能够抑制鳗弧菌且益生特性显著的潜在海洋益生菌ML1206。以野生牡蛎和鲈鱼的肠道内容物为分离样品,共分离到41株海洋细菌,其中18株分离自牡蛎,23株来源于鲈鱼。经溶血性实验发现,其中21株肠道细菌表现出明显的溶血活性,其余20株无溶血现象。接着以秀丽隐杆线虫为模式生物建立了V.anguillarum SDUM002245感染线虫模型,确定该病原菌在第9天的感染致死浓度为1.2×108 CFU/mL。以此为基础,建立了海洋益生菌保护线虫抑制鳗弧菌模型,从20株无溶血活性菌株中筛选出5株(菌株ML1206、ML1229、YLY05、YLY09和YLY28)保护效果较好的菌株,在感染第9天线虫存活率仍高于20%。结合耐酸耐胆盐实验,发现菌株ML1206、YLY05和YLY09均表现出较强的耐酸耐胆盐能力。经进一步体内复筛,最终选择既能有效抑制鳗弧菌又具有显著益生特性的肠道细菌ML1206作为潜在海洋益生菌进行后续研究。(2)明确了菌株ML1206的分类地位且将其喂食线虫后对线虫生命体征无副作用。结合分子生物学、16S rDNA测序和系统发育分析,确定菌株ML1206为海洋动性球杆菌(Planococcus maritimus)。通过检测该菌株对线虫生理指标的影响,发现潜在益生菌ML1206可以显著延长线虫寿命(平均寿命延长百分比为18.7%),但是对其吞咽率、体长、繁殖和运动能力没有不良影响。此外,急性经口毒性试验发现该菌株安全无毒。(3)通过透射电镜、转录组分析和qPCR技术对潜在海洋益生菌ML1206抑制鳗弧菌保护线虫的作用机理进行了初步探究。结合透射电镜和平板计数法发现线虫肠道内积累着大量V.anguillarum SDUM002245细菌,定植数量约2.5×104 CFU/mL/只。而菌株ML1206虽然不能附着于线虫肠道上皮细胞但是可以显著抑制菌株SDUM002245的定植。因此潜在海洋益生菌ML1206对线虫的保护作用与抑制V.anguillarum SDUM002245的定植有关。此外,通过转录组测序,菌株ML1206保护组与对照组相比,表达变化2倍以上的基因有506个,其中342个基因表达上调,164个基因表达下调。通过GO注释,在线虫各处理组中筛选到12个具有代表性的线虫防御基因进行qPCR验证,与对照组相比,ML1206保护组抗菌肽(ilys-3)和解毒相关基因(ugt-22、cyp-35A3和cyp-14A3)高度表达,具有统计学意义,其表达量的趋势与测序结果一致。综合本实验结果表明潜在海洋益生菌ML1206可能通过刺激线虫分泌和调控抗菌效应物和解毒蛋白来抑制鳗弧菌的感染从而发挥其保护作用。(4)完成了 5株海洋新菌的多相分类工作。菌株NS08T分离自威海小石岛水样,属于黄杆菌科、海水杆菌属的新物种,命名为快生海水杆菌(Aquimarina celericrescens)。菌株N53T分离自威海文登盐场沉积物,属于红杆菌科、玫瑰变色菌属的新物种,命名为嗜盐玫瑰变色菌(Roseovarius salinarum)。菌株w01T分离自威海小石岛沉积物,属于黄杆菌科、海水杆菌属的新物种,命名为沉积物海水杆菌(Aquimarinasediminis)。菌株PX7T分离自威海小石岛沉积物,属于红杆菌科、滨海杆菌属的新物种,命名为海洋滨海杆菌(Primorskyibacter marinus)。菌株YLY08T分离自野生鲈鱼肠道,属于红杆菌科,海球藻菌属的新物种,命名为鱼肠道海球藻菌(Oceaniglobus ichthyoenteri)。
其他文献
课程思政是高校落实立德树人根本任务和提高人才培养质量的重要渠道和必然路径,已成为高校思想政治工作的主要方式。有别于传统教学管理,课程思政需要高校充分运用教育行政管理的计划、组织、控制反馈职能,建立科学有效的管理机制,以保障课程思政充分发挥作用。研究着眼于教学管理的教学计划管理、运行管理及质量管理与评价三个环节,以协同治理理论和全面质量管理理论为基础,通过对案例学校进行研究,分析高校思想政治教育在融
学位
研究列车牵引变流模块IGBT(绝缘栅双极型晶体管)的服役特性,了解其性能退化规律,对确定牵引变流模块合理检修周期具有重要意义,也是保障牵引变流模块安全稳定运行的关键。从器件结构角度分析了列车牵引变流模块IGBT热应力失效、电应力失效和湿度应力失效3种模式的失效机理;对上海轨道交通17号线列车牵引变流模块IGBT的电性能和热性能退化评估发现,IGBT的电性能和热性能都存在一定程度退化;根据评估结果提
期刊
本文借鉴前人对于“抒情传统”的相关论述,认为“抒情”不只是一种文类或艺术风格,它也是一种生命态度、价值体系、政治信念,“抒情”也不仅仅是一种知识分子的感伤独语,它同样可以容纳历史、指向现实。依托于这种认识,笔者对四十年代沈从文所赋予“抒情”的丰富内涵进行了新的开掘,揭示沈从文抒情话语中所包含的现实面相与民主政治意涵,呈现沈氏此期抒情话语相较于前期的赓续与变异,纠正以往学界仅仅将沈从文“抽象的抒情”
学位
“产出导向法(POA)”是文秋芳教授提出的具有中国特色的外语教学理论。自产出导向法提出之后,近年来,国内众多研究者从多个方面进行了大量实践研究,并达到了满意的教学效果。学者们探索将该理论引入到英语专业技能型课程,如语法、写作、听力、口译、口语等课程的教学改革之中。近年来,一些学者尝试将该理论应用于非英语专业学生的英语学习,如大学英语课堂教学实践、对外汉语教学。少数学者研究考察POA与英语学习者单项
学位
植物种子发育既是植物学的基本理论问题,也是作物产量和品质改良的应用问题,因此探讨种子发育的调控机制显得尤为重要。玉米作为全球主要的粮食作物,不可或缺,所以玉米种子发育关键基因的功能研究更有重要意义。植物种子的发育起始于双受精,从双受精到种子成熟的过程中,许多基因参与了种子发育的遗传调控。其中,PPR基因家族主要通过影响细胞器RNA转录后加工过程,调控基因表达进而影响种子发育。PPR蛋白由核基因编码
学位
土壤盐碱化是困扰农业生产的一大难题,也是导致农业减产的主要非生物胁迫因素之一。提高农作物的耐盐碱能力是目前开发利用盐碱地最有效的方法之一,也是现代农业的发展方向。深入研究耐盐碱农作物的耐盐碱机制,可以为抗盐碱农作物的栽培和育种提供理论基础和实践价值。山融4号(SR4)是本实验室前期从通过不对称体细胞杂交方法创制的渐渗系中筛选出的耐盐碱小麦新品系。实验室前期从SR4中克隆了小麦甘油-3-磷酸酰基转移
学位
近几年来,我国公路建设取得了巨大的成就,带动并支撑了国民经济的快速增长,极大地方便了人们的出行,但与此同时因为重载交通导致大量的沥青路面病害也较早发生,给经济带来了损失。沥青路面的过早维修损耗了大量的投资,因此如何减少路面病害,保障沥青路面设计寿命一直是道路工作者关注与研究的重要课题。本文通过沥青性能试验及沥青混合料性能试验,就两种自主研发的直投式复合改性剂(分别用A、B表示)对沥青及沥青混合料的
学位
体育精神不仅可以提高学生自信心、自我效能感,更重要的是对学生的人格健全起到良好的促进作用。具备健全人格的初中生可以用积极主动和理智的态度面对现实学习、生活问题,具有社会责任感、义务感和一致的价值观。然而,目前相关研究证实,初中生人格存在发展不平衡的问题。因此,对于学生健全人格的培养是当务之急。本文采用文献研究法、教学实验法、问卷调查法、数理统计法、对比分析法等研究方法,以体育精神视域下篮球教学对塑
学位
小高遗址的堆积以后李文化时期为主,2017年发掘时采集了大量的浮选土样,获得了丰富的大植物遗存。目前为止发现的后李文化时期的遗址仅十余处,多数未经发掘,系统做过植物考古工作的遗址少之又少,小高遗址发掘所获得的材料十分重要。本文通过对大植物遗存数据进行分析,从植物性食物结构、生计模式、定居程度等角度,进一步了解小高遗址后李文化时期的社会经济状况及古人的生活。把植物遗存与考古出土背景相结合,我们发现当
学位
研究背景和研究目的皮肤质量约占成人体重的16%,是人体中最大的器官。当皮肤组织遭受到创伤时,成纤维细胞通过分裂、增殖,向受损部位进行迁移,并产生细胞外基质,以形成瘢痕组织来进行创伤缺口的填补。此时,肉芽组织发生纤维化,逐渐形成致密的纤维结缔组织,而皮肤微血管闭合、退化甚至消失。瘢痕组织的形成不仅影响着人们的心理健康和正常生活,也影响着皮肤正常的生理功能。真皮成纤维细胞是由胚胎时期的间充质细胞分化而
学位