【摘 要】
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目的 观察低氧条件下SD大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)骨桥蛋白(OPN)及自噬相关蛋白Beclin1、LC3B的表达,探讨低氧对自噬的影响;并通过OPN过表达及低表达慢病毒研究OPN对PASMC
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目的 观察低氧条件下SD大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)骨桥蛋白(OPN)及自噬相关蛋白Beclin1、LC3B的表达,探讨低氧对自噬的影响;并通过OPN过表达及低表达慢病毒研究OPN对PASMCs细胞自噬及细胞增殖力的调控作用。方法 细胞分为6组:常氧对照组(Normoxic)、低氧对照组(Hypoxia)、低氧+OPN干扰空病毒组(H+OPN EV)、低氧+OPN干扰慢病毒组(H+OPN sh RNA)、低氧+OPN过表达空病毒组(H+OPN OEV)、低氧+OPN过表达慢病毒组(H+OPN sho RNA)。各组分别用5-乙炔基-2’-脱氧尿苷(Ed U)阳性标记率法检测细胞增殖能力、流式细胞术分析细胞周期、Western Blot法检测OPN及自噬相关蛋白Beclin1、LC3B的表达,RT-PCR法检测自噬相关基因Beclin1、LC3B m RNA的表达。结果 经低氧干预后OPN和自噬相关蛋白Beclin1、LC3B的表达相较常氧组增高(p<0.05),细胞增殖力增强(p<0.05),促进细胞周期进入S期。低氧条件下慢病毒进行OPN RNA干扰后,与低氧对照组相比,低氧+OPN干扰慢病毒组,OPN蛋白表达量降低,Beclin1、LC3B蛋白表达量和m RNA都增高(p<0.05),细胞增殖能力减弱(p<0.05),细胞周期阻滞于G0/G1期;低氧条件下细胞经OPN过表达处理后,与低氧对照组比较,OPN过表达组OPN蛋白表达增高,自噬相关蛋白Beclin1、LC3B表达量降低(p<0.05),自噬相关基因LC3B的m RNA表达增强(p<0.05),Beclin1的m RNA未改变(p>0.05);细胞增殖能力和细胞周期无变化(p>0.05)。结论 低氧可使PASMCs OPN表达量增加,细胞自噬力和细胞增殖力增强;且OPN可促进低氧条件下PASMCs细胞增殖并负向调控细胞自噬。
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