G蛋白偶联受体（G protein-coupled receptor,GPCR）是具有多次跨膜结构的受体,在人体多种生命活动中具有重要的作用和意义。阿片受体μ（Opioid receptorμ,MOR）属GPCR超家族。目前,由于这类多次跨膜蛋白的结构复杂、纯化困难,制备具有结合这类蛋白完整空间构象的特异性单克隆抗体非常困难。迄今为止,尚无靶向MOR的单克隆抗体的相关报道及研究。MOR主要分布于中枢神经系统,参与吗啡等阿片类药物的镇痛及耐受作用。除此之外,MOR还分布于结肠、乳腺、前列腺、肺和肝等许多外周组织及器官。已有文献表明,MOR高表达于肝癌组织及细胞,且MOR与肝癌进展呈正相关,但是MOR促进肝癌进展的具体细胞分子机制还有待进一步阐述。本研究旨在采用DNA结合细胞免疫的策略,利用传统的杂交瘤技术制备靶向MOR且具有空间活性的单克隆抗体;通过特异性敲低结合回复MOR的表达,研究MOR在肝癌进展中的作用;在上述基础上进一步探讨所获得的靶向MOR的单克隆抗体对肝癌的影响及可能的细胞与分子机制。本研究分为两个部分:在第一部分内容中,我们进行了MOR的单克隆抗体的制备和鉴定。我们通过查询人的c DNA文库找到人MOR的c DNA序列,对此序列进行优化后,将其插入载体p CI-neo中构建重组载体p CI-neo-MOR,再将此重组载体转染进入人胚肾细胞（HEK293T）和小鼠的肾癌细胞（Renca）,构建稳定过表达人MOR的细胞系。然后,采用质粒DNA结合细胞免疫的策略,结合传统的杂交瘤制备技术,我们筛选并制备了靶向人MOR的单克隆抗体。最后,我们采用酶联免疫吸附和蛋白免疫印迹实验检测了单抗的亲和性与特异性,采用细胞免疫荧光和流式细胞术检测了单抗结合空间构象抗原的能力,结果显示所获单抗的特异性及亲和性良好,且具备良好的结合空间构象抗原的能力。在第二部分内容中,我们利用所制备的单抗对MOR在肝癌中的作用及机制进行了深入研究。首先,我们利用了Western blot、免疫组化等实验对MOR在肝癌中的表达水平进行了鉴定,发现MOR显著高表达于肝癌细胞和组织;我们利用si RNA将MOR敲低后,肝癌细胞的增殖和迁移受到抑制。其次,通过一系列的细胞功能实验,我们发现所制备的单克隆抗体可以通过阻滞肝癌细胞周期从而抑制其增殖。我们研究了MOR与CD147的分子间相互作用,发现单抗对肝癌的抑制作用是通过MOR调控CD147-p53-MAPK通路所介导的。最后,通过细胞凋亡和Western blot检测,我们发现所制备的单克隆抗体可以通过抑制p-ERK的活性增强肝癌细胞的顺铂敏感性。简而言之,我们的研究结果初步表明,采用质粒免疫结合细胞免疫的方法制备具有多次跨膜结构蛋白的功能抗体是可行的,利用该方法,我们成功制备了靶向MOR的单克隆抗体（单抗3A5C7）。我们进一步验证了MOR在肝癌发展中的促进作用,阐明了所获得的单抗3A5C7可以通过其靶点MOR调控CD147-p53-MAPK通路抑制肝癌细胞的增殖,也可以通过抑制p-ERK的活性而增强肝癌细胞的顺铂敏感性,逆转肝癌细胞的耐药性。