工作目的:术前焦虑加重术后疼痛是临床常见现象,其机制尚未明确。心理应激会激活下丘脑-垂体-肾上腺（HPA）轴引起GCs合成释放增多。已有研究表明,GCs可导致神经可塑性发生改变。GABA能系统作为参与形成中枢抑制的最主要部分,GABA能系统活性异常可导致多种神经性病变,其中就包括疼痛。之前的研究发现,一种神经元PAS结构域蛋白（Npas4）可以促进GABA能突触的发生,并在维持平衡的神经网络活动中起着重要作用。本研究将通过建立大鼠术前焦虑模型,研究GCs信号在术前焦虑诱发术后痛觉过敏发展过程中的作用及相关机制,为临床上术前焦虑诱发的术后痛觉过敏的预防和治疗提供新的思路。研究方法:本实验使用单次延长应激法（SPS）构建大鼠术前焦虑模型,机械缩足阈值（PWMT）来评估大鼠跖底切口后的疼痛阈值,从而判断该模型是否建立成功。Elisa法检测大鼠血清CORT变化,Real-time荧光定量PCR和/或Western blotting法检测大鼠L3～L5段脊髓Npas4和GABA能标志物（GAD65、GAD67、GABAAα1和GABAAγ2）（提示GABA能系统活性）的表达,免疫荧光双标法观察Npas4在大鼠脊髓背角处的细胞定位。分别在大鼠SPS前30min时单次腹腔注射糖皮质激素受体（GR）拮抗剂RU486（30mg/kg）和盐皮质激素受体（MR）拮抗剂螺内酯（Spironolactone）（30mg/kg）,痛行为学评估其镇痛效应。Real-time荧光定量PCR法检测大鼠L3～L5段脊髓Npas4和GABA能标志物（GAD65、GAD67、GABAAα1和GABAAγ2）的表达。分别在SPS前7d鞘内注射rAAV-Npas4/rAAV-Npas4 RNAi（滴度:4×1010 TU/ml,10μl）过表达/干扰 Npas4,痛行为学评估其镇痛效应,Real-time荧光定量 PCR法检测大鼠L3～L5段脊髓GABA能标志物（GAD65、GAD67、GABAAα1和GABAAγ2）的表达。提取大鼠原代脊髓神经元在体外培养,用外源性皮质酮（CORT）直接刺激,Real-time荧光定量PCR法检测大鼠L3～L5段脊髓Npas4和GABA能标志物（GAD65、GAD67、GABAAα1 和 GABAAγ2）的表达。结果:1.痛行为学检测发现SPS大鼠在跖底切口后有明显的PWMT减少,说明造模成功;2.Elisa检测发现造模后第1～14天血清CORT含量增加;3.real-time 荧光定量 PCR 检测发现造模后第 7 天和第 14 天两个时间 点大鼠 L3～L5 段脊髓Npas4和GABA能标志物减少（提示GABA能系统受损）;4.Western blotting检测发现造模后第7～14天Npas4减少;5.SPS前30min时单次腹腔注射RU486或螺内酯,痛行为学检测发现RU486可明显减轻SPS大鼠的术后疼痛,real-time荧光定量PCR提示RU486改善GABA能标志物和Npas4的降低;6.过表达Npas4缓解了 SPS大鼠的术后痛觉过敏行为,以及恢复SPS引起的GABA能标志物的降低,而干扰Npas4则加重SPS大鼠的术后痛觉过敏行为,导致Npas4和GABA能标志物进一步降低;7.大鼠原代脊髓神经元在10μM的CORT刺激24h后,Npas4和GABA能标志物也同样是降低的,且可被RU486逆转。结论:术前焦虑导致脊髓GABA能系统受损,从而引起痛觉过敏,这是由于糖皮质激素诱导的Npas4下调所致。