背景：　　MDA-MB-231细胞株发生侵袭和迁移过程中，细胞骨架结构分子细丝蛋白A（FLNa）在乳腺癌及其和抑癌基因14-3-3σ两者之间的相关性如何，至今尚未见报导。　　目的：　　探讨沉默FLNa后MDA-MB-231细胞株中FLNa和14-3-3σ的表达的改变，二者之间的关系，为揭示二者在乳腺癌侵袭和迁移中所发挥的作用及其调控机制，并可能为乳腺癌靶向分子治疗提供新的靶点。　　方法：　　1.用L-15培养基体外培养MDA-MB-231细胞株，待细胞贴壁融合达60-80%时进行实验，细胞随机分为三组：　　FLNa-siRNA组(FLNa-siRNA group)：转染靶向FLNa的FLNa-siRNA　　阴性对照组(negative control group)：转染阴性对照siRNA　　空白对照组(blank control group)：未加特异性siRNA的转染试剂组　　2.采用人工脂质体转染技术，将靶向FLNa的FLNa-siRNA转入MDA-MB-231细胞株中，在不同时间点进行相关实验：　　①通过倒置荧光显微镜观察并评估转染效率。　　②通过Realtime-PCR和Western blot方法，分别在mRNA水平和蛋白水平检测FLNa和14-3-3σ表达水平的改变、是否存在差异并分析二者之间的关系。　　③应用鼠抗人FLNa单克隆抗体和兔抗人14-3-3σ单克隆抗体，及相应荧光二抗进行免疫荧光双染技术，通过荧光显微镜观察FLNa与14-3-3σ的分布范围是否存在共定位。　　3.对转染FLNa-siRNA的MDA-MB-231细胞株进行迁移和侵袭能力检测　　①划痕损伤实验：转染24h后选取三个时间点：0h，12h，24h进行划痕损伤实验，利用phtoshop软件测量划痕宽度变化，检测转染后体外迁移能力的改变。　　②Transwell实验：转染24h后接种细胞到Transwell小室，继续孵育24h后在显微镜下随机取5个视野计数穿膜的细胞数，评价转染后体外侵袭能力的改变。　　结果：　　1.转染效率　　L-15培养基体外培养MDA-MB-231细胞株生长良好，转染效率达到80%以上。　　2.Realtime-PCR显示沉默FLNa后FLNa mRNA表达降低而14-3-3σmRNA表达上调　　①FLNa mRNA表达结果显示：FLNa-siRNA组相对定量值（0.43±0.10），与空白对照组（1.00±0.00）和阴性对照组（1.03±0.16）相比较，差异有显著统计学意义（P＜0.05）；空白对照组与阴性对照组相比较差异无统计学意义(P＞0.05)。　　②14-3-3σmRNA表达结果显示：FLNa-siRNA组相对定量值（1.32±0.11）、与空白对照组（1.00±0.00）和阴性对照组(0.97±0.16)相比较，差异有显著统计学意义（P＜0.05）；空白对照组和阴性对照组相比较差异无统计学意义(P＞0.05)。　　3.Western blot显示沉默FLNa后FLNa蛋白表达降低而14-3-3σ蛋白表达上调　　①FLNa蛋白表达结果显示：FLNa-siRNA组相对定量值为（0.40±0.02），与空白对照组(0.86±0.05)和阴性对照组的(0.85±0.04)相比较，差异有显著统计学意义（P＜0.01）；空白对照组和阴性对照组相比较差异无统计学意义(P＞0.05)。　　②14-3-3σ蛋白表达结果显示：FLNa-siRNA组相对定量为（0.38±0.06），与空白对照组(0.27±0.05)和阴性对照组(0.26±0.05)相比较，差异有显著统计学意义（P＜0.05）；空白对照组和阴性对照组相比较差异无统计学意义(P＞0.05)。　　4.三组细胞爬片免疫荧光双染显示FLNa和14-3-3σ共同定位于胞浆　　转染48小时后，通过荧光显微镜观察，在空白对照组和阴性对照组的胞浆及胞膜中观察到FLNa和14-3-3σ的较强的荧光显色，并且两者的分布范围相似，有着共同的定位分布；沉默FLNa可见其荧光显色减弱而14-3-3σ则明显增强。　　5.细胞划痕实验显示迁移距离明显降低　　①划痕12小时各组的迁移距离（μm）：FLNa-siRNA组迁移距离(114.91±10.47)，空白对照组(181.58±20.94)，阴性对照组(159.65±28.68)。　　②划痕24小时各组的迁移距离（μm）：FLNa-siRNA组迁移距离(233.33±21.80)，空白对照组(292.10±26.06)，阴性对照组(307.89±13.30)。　　划痕损伤后12h、24h，FLNa-siRNA组细胞缓慢向中央迁移，缺损处修复缓慢，向划痕处的迁移距离明显低于空白对照组和阴性对照组，差异有显著统计学意义（p＜0.01）。空白对照组及阴性对照组细胞划痕愈合明显，单因素方差分析显示两者迁移距离差异无统计学意义(P＞0.05)。　　6.Transwell侵袭实验显示穿膜细胞数明显减少　　三组细胞均能穿过基质胶到达滤膜底面，FLNa-siRNA组穿膜细胞数为（25±1.41/HP）；空白对照组为（36.4±3.91/HP）；阴性对照组为（34.4±2.30/HP）；FLNa-siRNA组穿膜细胞数明显低于空白对照组和阴性对照组。单因素方差分析显示差异有显著的统计学意义（P＜0.01），空白对照组穿膜细胞数与阴性对照组相似，差异无统计学意义(P＞0.05)。　　结论：　　1.本研究验证了MDA-MB-231是一株FLNa高表达，14-3-3σ低表达的细胞株。　　2.本研究通过免疫荧光双染技术首次发现FLNa与14-3-3σ共同定位于胞浆，沉默FLNa可见其荧光显色减弱而14-3-3σ则明显增强，提示二者的调控关系。　　3.本研究首次明确了FLNa与14-3-3σ之间的调控关系：我们沉默FLNa的表达，能显著抑制MDA-MB-231细胞株中FLNa mRNA和蛋白表达水平，同时还能明显地上调14-3-3σmRNA和蛋白表达水平。本研究结果说明FLNa可调控14-3-3σ的表达，FLNa具有负向调控14-3-3σ的作用。　　4.体外细胞功能实验表明FLNa调控14-3-3σ的表达与MDA-MB-231细胞株的体外迁移和侵袭潜能密切相关。因此，可通过沉默FLNa上调14-3-3σ在mRNA和蛋白水平的表达，从而有效地降低乳腺癌及其MDA-MB-231细胞株的体外侵袭和迁移潜能。