【摘 要】
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在中国有500多万的血吸虫病患者,日本血吸虫是引起血吸虫病的病原体.血吸虫成虫寄生在人类及哺乳动物宿主的血管内,吞食大量的红细胞,降解血红蛋白(Hb)以提供生长、发育和繁
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在中国有500多万的血吸虫病患者,日本血吸虫是引起血吸虫病的病原体.血吸虫成虫寄生在人类及哺乳动物宿主的血管内,吞食大量的红细胞,降解血红蛋白(Hb)以提供生长、发育和繁殖所需.已报道了5种参与了Hb降解过程的蛋白酶:组织蛋白酶B、L、D、C和legumain,这些酶的抑制可能有抗血吸虫的作用.阐明血吸虫降解Hb的过程,有助于寻找和设计血吸虫病药物和疫苗开发的新靶点.组织蛋白酶L是血吸虫组织提取物中最主要的组织蛋白酶,而且主要分布在血吸虫的消化道内,因此可能在血吸虫降解Hb的过程中起了关键性作用.此外,组织蛋白酶L在血吸虫的繁殖过程中也起着重要作用.目前已报道了两个编码日本血吸虫组织蛋白酶L的cDNA序列:SjCL1和SjCL2.由于血吸虫组织蛋白酶L和人的组织蛋白酶L的同源性较低、对蛋白酶抑制剂的选择性不同,所以可开发选择性抑制血吸虫蛋白酶L的药物.目前关于曼氏血吸虫组织蛋白酶L的报道较多,而关于日本血吸虫组织蛋白酶L的研究很少.考虑到组织蛋白酶L对日本血吸虫的重要生理作用,该研究对日本血吸虫组织蛋白酶L的分子生物学进行初步探讨.该研究通过反向巢式PCR技术得到了SjCL1基因的5端未知序列,构建了SjCL1和SjCL2的真核表达重组质粒,并稀选得到了可稳定表达SjCL1和SjCL2蛋白酶的CHO-K1细胞.组织蛋白酶L的同源性不高,SjCL1和SjCL2蛋白酶为完全两个不同的基因的产物.重组SjCL1和SjCL2蛋白酶活性的合适pH范围不同,表明它们的生物学功能也存在差异.日本血吸虫组织蛋白酶L和人组织蛋自酶L在含8个氨基酸残基的S2功能区处存在4个氨基酸残基的差异.因为组织蛋白酶L的特异性取决于蛋白酶的S2功能区与底物的P2区的相互作用,所以开发选择性抑制血吸虫组织蛋白酶L的药物是有可能的.该研究为建立以组织蛋白酶L为靶点的抗血吸虫药物的高通量筛选(HTS)模型奠定了基础.在该模型中,组织蛋白酶L对底物的降解导致GAL4转录激活因子的失活,进一步引起荧光素酶报告系统的失活,从而检测化合物对组织蛋白酶L的抑制作用.
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