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研究背景:2型糖尿病致死致残的重要原因之一就是动脉粥样硬化(AS),至今其发生的机制尚不清楚,而高血糖作为糖尿病患者体内最具有特征性的改变,在糖尿病血管并发症中起着始动和关键的作用。AS是一种与脂质在动脉壁聚集相关和各种炎性细胞参与的慢性炎症过程, AS越来越被认为是一种慢性炎症和自身免疫性疾病,免疫反应和炎症是致其发病和发展的关键,是斑块不稳定发生破裂的中心环节。近年来对树突状细胞(DC)与AS的关系的研究成为一个新的热点, DC是目前已知功能最强的专职抗原递呈细胞(APC),最大特点是能够刺激初始型T淋巴细胞活化和增殖,而其它的APC如巨噬细胞和B淋巴细胞仅能刺激己活化的T淋巴细胞或记忆T淋巴细胞,因此DC是特异性免疫应答的始动者。许多研究表明了DC参与了AS的病理发生发展的全过程,在激活和促进AS的炎症免疫反应中起着重要的调控作用。树突状细胞作为形成泡沫细胞的源细胞之一和重要的免疫调节细胞,在其中发挥关键的作用。内吗啡肽是新发现的μ-阿片受体的内源性配体,具有广泛的生物学作用,如镇痛、心血管效应和免疫应答等。最新研究发现EM-1能抑制巨噬细胞吞噬脂质,下调单核-巨噬细胞源性泡沫细胞表面CD36的表达,影响肿瘤坏死因子(TNF-α)和干扰素-γ(IFN-γ)的释放,而影响动脉斑块的形成,可能具有抗炎、抗动脉粥样硬化的作用。那么EM是否能通过影响高糖环境下DC的分化成熟和免疫功能,而参与AS的形成和发展,目前尚未见报道,值得我们进行探讨。 目的: 1.研究高糖环境下人DC表型的变化,以进一步探求高糖与AS之间的联系; 2.观察内吗啡肽-1对高糖环境下人树突状细胞表型和免疫功能的影响; 3.初步探讨内吗啡肽-1影响高糖环境下人树突状细胞免疫功能的机制; 方法: 1.从正常人外周血中提取和分离单个核细胞,用rh GM-CSF和rh IL-4诱导成为未成熟树突状细胞(imDC);imDC用不同浓度D-葡萄糖(5mmol/L、10mmol/L和25mmol/L)刺激2天,用流式细胞术检测DC的表型CD83、CD86、CD36、和μ-阿片受体(MOR)、趋化因子受体CCR7的表达变化。 2. imDC用高浓度D-葡萄糖(25mmol/L)和不同浓度的EM-1(10-6mmol/L、10-8mmol/L和10-10mmol/L)共培养刺激2天,用流式细胞术检测DC的表形CD83、CD86、CD36和CCR7的变化;用ELISA法检测DC分泌细胞因子IL-10和IL-12的变化;与自体T淋巴细胞共培养3天,用CFSE法检测T淋巴细胞增殖情况的变化。 3. imDC用高浓度D-葡萄糖(25mmol/L)、高浓度的EM-1(10-6mmol/L)和纳洛酮(10-6mmol/L)共培养刺激2天,用流式细胞术检测DC的表型CD83、CD86、CD36和CCR7的变化;与自体T淋巴细胞共培养3天,用CFSE法检测T淋巴细胞增殖情况的变化。 4.收集正常糖组(CD-GLU=5mmol/L)、高糖组(CD-GLU=25mmol/L)和EM组(CD-GLU=25mmol/L和 CEM-1=10-6mmol/L)的DC,用 RT-PCR检测细胞TLR4mRNA的表达。 结果: 1.与正常糖组比较,高糖能诱导DC活化趋向成熟,使表型CD83、CD86、CD36、CCR7和MOR表达上调; 2. EM-1使高糖环境下DC表型CD36、CCR7和CD86表达上调;EM-1抑制高糖环境下DC释放炎性因子IL-12和IL-10,抑制高糖环境下DC对T淋巴细胞的增殖反应能力; 3. EM-1对高糖环境下DC表型和功能的影响被纳洛酮抑制; 4.高糖促使DC TLR4mRNA的表达,而EM-1能抑制高糖的作用。 结论: 1.高糖促使DC活化趋向成熟,增强其迁移和调节脂质的能力; 2. EM-1对高糖环境下DC功能影响复杂,一方面能上调DC表型分子,增强其迁移和调节脂质能力;另一方面抑制DC释放炎性因子,抑制T淋巴细胞的增殖; 3. EM-1可能是通过作用于MOR影响高糖环境下DC的表型和功能改变,可能与TLR4介导的信号通路有关。