目的明确2017年3月1日至2017年7月31日期间浙江省碳青霉烯耐药肺炎克雷伯菌（Carbapenem-Resistant Klebsiella pneumoniae,CRKP）的多黏菌素MICs分布及耐药率。探明CRKP多黏菌素的耐药机制,为减少多黏菌素耐药株产生提供理论依据。方法连续收集2017年3月1日至2017年7月31日期间浙江省36家医院临床所有部位分离的CRKP菌株,采用微量肉汤稀释法测定CRKP的多黏菌素MICs,应用脉冲场凝胶电泳（PFGE）方法对多黏菌素耐药菌株进行同源性分析,通过聚合酶链反应（PCR）扩增耐药菌株双组分调控系统相关调控基因（mgr B,pho P,pho Q,pmr A,pmr B,crr AB）及mcr-1基因,并进行一代测序及序列比对,明确是否存在突变。通过荧光实时定量PCR（q RT-PCR）方法比较调控基因（mgr B,pho P,pho Q,pmr B,pmr C,pmr K）在多黏菌素耐药组及敏感组中表达量的差异。结果共收集CRKP非重复菌株872株,CRKP对多黏菌素的MIC₅₀为<0.125mg/L,MIC₉₀为0.25mg/L;多黏菌素耐药率为1.49%（13/872）。PFGE结果显示13株多黏菌素耐药CRKP可分为11个克隆型,未见明显克隆传播现象。在13株多黏菌素耐药的CRKP中,1株（KP13223）存在mcr-1基因,其MIC为4mg/L;在其余12株耐药菌株中,75%（9/12）的菌株多黏菌素MIC值≥16mg/L。PCR及测序结果显示,有2株CRKP存在mgr B基因插入,分别为IS1家族序列插入（菌株KP45856）和IS5家族序列插入（菌株KP13090）;5株存在pmr B基因突变导致氨基酸位点改变,分别为pmr B（D150Y,菌株KP02105）,pmr B（A246T,V287M,菌株KP24030）,pmr B（S85R,菌株KP01101及KP01224）,pmr B（K220Q,A246T,菌株KP01214）,在pmr B突变菌株中有2株菌同时存在pho P基因突变致氨基酸位点改变,其中KP24030为pho P（I162V）,KP01214为pho P（P74L）。荧光定量PCR结果显示,在12株无mcr-1基因的多黏菌素耐药CRKP中,相较于敏感组,有75%（9/12）的菌株pmr C基因相对表达量升高,58.33%（7/12）的菌株pmr K基因相对表达量升高。其中有6株同时存在pmr C和pmr K基因相对表达量的升高,同时它们的多黏菌素MIC值有5株为≥16mg/L,表现为高水平的多黏菌素耐药。存在pmr B基因突变的5株耐药株相比于敏感组,pmr C表达量明显升高（p=0.02）。存在mgr B基因突变的2株CRKP菌株中,mgr B基因表达量与敏感组相比均有下降,且它们的下游基因pho P及pmr K表达量与敏感组相比有升高。在5株未发现任何突变位点的多黏菌素耐药CRKP中,有3株菌的pmr C基因相对表达量较敏感组升高。结论浙江省CRKP对多黏菌素的耐药率较低,多黏菌素具有良好的体外抗菌活性。本研究发现,在浙江省CRKP中,mcr-1介导的多黏菌素耐药仅1株,双组分调控系统基因突变导致pmr C及pmr K基因表达量升高在CRKP多黏菌素耐药中具有重要作用。