研究目的： 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)缺乏症是一种常见的人类遗传性酶缺陷疾病，G6PD基因突变是导致G6PD缺乏症的主要分子基础。本研究调查云南玉溪G6PD缺乏症的发病率；探讨检测G6PD缺乏症基因突变的有 效方法；从DNA分子水平鉴定云南玉溪G6PD缺乏症的基因突变类型及 其特征，揭示该地区G6PD缺乏症的分子基础。 研究方法： 筛查云南玉溪市八县一区当地无血缘关系居民450人，男、女各 225人，采用NBT纸片法定性筛查为阳性，再经NBT定量法测定G6PD酶活性，降低者临床诊断为G6PD缺乏症。共有48例被确诊为G6PD缺乏症患者。首先采用突变特异性扩增系统法(PCR-ARMS)检测中国人中最常见的三种突变：nt l376G→T，nt l388G→A，nt95A→G，然后进行单链构象多态性(PCR-SSCP)分析，最后运用DNA直接测序技术对随机抽取4份PCR-ARMS法阳性样本及4份PCR-SSCP阳性样本进行测序分析和证实，对2份PCR-SSCP有电泳迁移异常，但ARMS法未能检测出的样本进行测序分析。 研究结果： 1、云南玉溪当地人群G6PD缺乏症的发病率在450例云南玉溪当地人群中，经NBT试纸法及NBT还原定量法筛查发现48例G6PD缺乏症患者(男31人，女17人)，云南玉溪G6PD缺乏症的发病率为10.67％，男性G6PD缺乏症发病率为13.78％，女性G6PD缺乏症发病率为7.56％；男、女发病率性别比例为1.82。 2、PCR—ARI～,B法检测G1 376T、G1388A和A95G结果48例样本经PCR-ARMS法发现nt 1388 G→A 2 1例(43.75％)、 nt1376G→T 4例(8.33％)、nt95A→GO例(0.00％)。所检测样本中未发现nt95A→G突变型。这三种常见突变共占云南玉溪人群G6PD缺乏症的52.08％。 3、PCR-SSCP法检测结果和测序分析 经PCR-SSCP法发现27例样本有电泳迁移率异常，与PCR-ARMS法结果相印证，发现21例(43.75％)为nt1388G→A,4例(8.33％)为nt1376G→T，2例电泳迁移异常，但ARMS法未能检测出。随机抽取4份PCR-ARMS法阳性样本及4份PCR-SSCP阳性样本作PCR-DNA测序进行分析和证实，其测序结果与PCR-ARMS法的结果吻合。对2份未知突变样本进行测序分析，证实为nt1311C→T。 4、复合突变 我们在对PCR-ARMS法及PCR-SSCP法检测到的阳性结果进行测序时发现1例nt1376G→T/IVS-11 93T→C复合型突变，1例nt1376G→T/nt1311C→T复合型突变和1例nt1388G→A/IVS-11 93T→C复合型突。研究结论： 1．云南玉溪G6PD缺乏症的发病率为10.67％，男性G6PD缺乏症发病率为13.78％，女性G6PD缺乏症发病率为7.56％；男、女发病率性别比例为1.82。 2．云南玉溪G6PD缺乏症基因突变以n13886→A突变最常见，占43.75％：nt1376G→T突变占8.33％，所检样本中未发现nt95A→G。这与蒋玮莹等调查相吻合<[]14、36]>，而中国的广西、广东和台湾的基因型分布以nt1376G→T最常见，其次是nt1388G→A和nt95A→G； 3．PCR—ARMS法操作简单，不需同位素，不需限制性内切酶，仅只需一个PCR反应，用琼脂糖凝胶电泳，EB染色即可以直接得到阳性结果(基因突变的类型)，并且快速准确，方便经济，省钱省力，因此它是一种检测G6PD基因已知常见突变的较好的方法，将会有广阔的应用前景。但PCR—ARMS分析检出的阳性率不高，远低于PCR—SSCP分析。 4．PCR-SSCP法快速灵敏，准确可靠，无需同位素，无放射性污染，阳性检出率很高，较其它方法更具优点，是一种检测基因突变尤其是检测点突变的行之有效的方法。更适用于大规模的基因突变筛查，将在G6PD缺乏症和其它遗传性疾病的研究中发挥重要作用。PCR-SSCP分析结合PCR-DNA直接测序分析可将需作测序分析的DNA片段限制到最小范围，从而节省了大量的人力及物力，既做到快速灵敏，又做到准确可靠。将在G6PD缺乏症和其它遗传性疾病的研究中具有广泛的应用前景和价值。 5．Nt l388和nt1376突变是中国人中最常见的两种突变，在云南玉溪本土居民中发现的这些突变，揭示中华民族有着共同的起源。本研究结果不仅为阐明G6PD缺乏症的分子基础提供了科学依据，而且也为阐明G6PD基因的变异提供了新的科学资料，填补了云南玉溪G6PD缺乏症基因研究空白，对开展G6PD缺乏症的基因诊断及G6PD基因治疗的研究具有重要的理论价值和现实意义。