【摘 要】
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由剪接体催化完成的前体mRNA的剪接是真核细胞重要的生物过程。剪接体是由U1、U2、U4、U5、U6 5个小核核糖核蛋白和许多其他蛋白组成的动态大分子复合物。U4/U6.U5三联体是剪接体装配及行使功能的最重要的组分,它由U5和配对的U4/U6小核核糖核蛋白以及30多个蛋白共同组成。其中Snu114、Brr2和Prp8是三联体三个重要的蛋白。GTP酶Snu114和Prp8调节解旋酶Brr2的活性从
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由剪接体催化完成的前体mRNA的剪接是真核细胞重要的生物过程。剪接体是由U1、U2、U4、U5、U6 5个小核核糖核蛋白和许多其他蛋白组成的动态大分子复合物。U4/U6.U5三联体是剪接体装配及行使功能的最重要的组分,它由U5和配对的U4/U6小核核糖核蛋白以及30多个蛋白共同组成。其中Snu114、Brr2和Prp8是三联体三个重要的蛋白。GTP酶Snu114和Prp8调节解旋酶Brr2的活性从而调控U4/U6 Sn RNA的解旋。Prp4是剪接体组分中的唯一激酶,在裂殖酵母中为必需蛋白。本实验室前期研究发现,作为裂殖酵母中的致死基因在禾谷镰刀菌中能够被敲除,但是突变体生长严重缺陷,且容易角变。通过对320个角变子的FgSNU114测序,鉴定了分布在十个角变子上的四个突变位点。这是首次发现FgSNU114上的点突变可以抑制Fgprp4突变体的表型。这四个角变位点分别位于FgSNU114的D1、D2、D3、D4结构域,同源建模结果显示,这些突变并没有影响蛋白的总体结构,但对侧链结构及氢键有影响。角变子表型分析发现尽管角变子的生长速度都已恢复到野生型的水平,它们的致病力还存在严重缺陷,并且角变子有性生殖也不正常。RNA-Seq分析发现与野生型相比角变子S172中30%左右的内含子的剪接还存在缺陷。尽管质谱分析和模拟磷酸化实验证明FgSnu114不是Fg Prp4的磷酸化底物,D222N突变减弱FgSnu114与Fg Prp8的互作,而ΔK695使FgSnu114与Fg Brr2的互作减弱,这些结果表明角突变通过改变FgSnu114与Fg Brr2或Fg Prp8的互作来恢复由于Fg Prp4缺失引起的剪接缺陷。
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