【摘 要】
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传染性支气管炎病毒（Infectious bronchitis virus,IBV）可感染鸡呼吸、消化、泌尿及生殖等系统,在临床上表现出较广泛的组织嗜性,IBV引发的传染性支气管炎（Infectious bronchitis,IB）可使鸡增重减慢、饲料报酬降低、产蛋量和蛋品质下降,给养鸡业带来了巨大威胁。目前中国流行的IBV存在多种基因型,其中以LX4基因型为主,国内分离的多数IBV与常用疫苗毒的
【基金项目】
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河北省现代农业产业技术体系蛋肉鸡创新团队项目；
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传染性支气管炎病毒（Infectious bronchitis virus,IBV）可感染鸡呼吸、消化、泌尿及生殖等系统,在临床上表现出较广泛的组织嗜性,IBV引发的传染性支气管炎（Infectious bronchitis,IB）可使鸡增重减慢、饲料报酬降低、产蛋量和蛋品质下降,给养鸡业带来了巨大威胁。目前中国流行的IBV存在多种基因型,其中以LX4基因型为主,国内分离的多数IBV与常用疫苗毒的基因型和血清型均不同;高频率的重组加速了 IBV变异株的出现。近年来河北省鸡群也常发生IB。本研究拟从临床收集的病料分离、鉴定IBV,对IBV分离毒M蛋白基因、S1蛋白基因和全基因组进行遗传变异分析,用代表毒株接种SPF鸡,建立1种针对IBV M蛋白基因的实时荧光定量PCR方法,旨为了解河北省IBV的流行态势变化及为IB的防控提供有益参考。从河北省部分地区收集的病料中分离、鉴定到20株IBV。遗传变异分析结果表明,20株IBV分离毒M蛋白基因编码区长678或681 nt,分别编码225或226个氨基酸;与45株参考毒株的核苷酸和氨基酸同源性分别为85.4%～100%和86.7%～100%;均与疫苗毒YX10 D90 vaccine株亲缘关系较近;均与疫苗毒H120、H52、Connecticut株等亲缘关系较远。20株IBV分离毒S1蛋白基因编码区长1608/1611/1620 nt,分别编码536/537/540个氨基酸;与45株参考毒株的核苷酸和氨基酸同源性分别为60.6%～99.3%和 49.2%～98.9%。20 株 IBV S1 蛋白裂解位点模式为HRRRR/HRRKR/HRHRR;均属I群中的 LX4（QX）型 IBV,均与疫苗毒 YX10 D90株亲缘关系较近;与III群中疫苗毒ArkGAP1、Connecticut、H120、H52株亲缘关系较远。全基因组序列分析结果表明,ck/CH/HB/20株基因组全长为27672 nt,具有典型的IBV基因编码特征。遗传进化分析结果表明,ck/CH/HB/20株与QX型SC/SDL/19株和LX4型CK/CH/LAH/1806株亲缘关系最近;与疫苗毒YX10 D90株亲缘关系较近;与疫苗毒4/91、H120、H52株等亲缘关系较远。SPF鸡人工接种试验结果表明,接种IBV分离毒的6组鸡临床症状、剖检病变均与文献报道相似;6株IBV分离毒接种鸡的排毒持续期长短不一,泄殖腔排毒时间比呼吸道长。ELISA检测结果表明,这6组鸡中最早检测到IBV抗体的时间为7 dpi,最晚为28 dpi,但接种IBV分离毒的6组鸡的IBV抗体阳性持续期长短不一。这表明6株IBV分离毒均可复制IB模型。整个试验期内,空白对照组均未见临床症状、采集脏器均无肉眼病变;采集棉拭子样品均呈IBV阴性;采集血清样品均呈IBV抗体阴性。研究表明,针对IBV M基因建立的TaqMan荧光定量PCR方法仅可特异性扩增IBV,但对H5、H7和H9亚型AIV及NDV均无扩增信号;其最低检测限为10 copies/μL,常规PCR最低检测限为1.0×102 copies/μL;重复性结果良好;应用结果显示,该方法对临床病料中IBV的检出率为42%,常规PCR检出率为39%。
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